NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου

Οι ενεργοποιούμενοι από Ασβέστιο, μικρής αγωγιμότητας (SK), δίαυλοι καλίου παρουσιάζουν τασεο-ανεξάρτητη δράση, ενώ ενεργοποιούνται χημειομηχανικά από αυξημένα ενδοκυτταρικά επίπεδα Ασβεστίου (σε εύρος μM), όπως συμβαίνει για παράδειγμα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Οι SK δίαυλοι προκαλ...

Πλήρης περιγραφή

Λεπτομέρειες βιβλιογραφικής εγγραφής
Κύριος συγγραφέας:	Κάνδιας, Νικόλαος
Άλλοι συγγραφείς:	Σπυρούλιας, Γεώργιος
Μορφή:	Thesis
Γλώσσα:	Greek
Έκδοση:	2008
Θέματα:	Καλμοδουλίνη Δίαυλοι SK2 Μεθυπερπόλωση TR2C NMR 615.19
Διαθέσιμο Online:	http://nemertes.lis.upatras.gr/jspui/handle/10889/1001

id	nemertes-10889-1001
record_format	dspace
spelling	nemertes-10889-10012022-09-05T13:57:51Z NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου Κάνδιας, Νικόλαος Σπυρούλιας, Γεώργιος Σπυρούλιας, Γεώργιος Κορδοπάτης, Παύλος Βουκελάτου, Γεωργία Καλμοδουλίνη Δίαυλοι SK2 Μεθυπερπόλωση TR2C NMR 615.19 Οι ενεργοποιούμενοι από Ασβέστιο, μικρής αγωγιμότητας (SK), δίαυλοι καλίου παρουσιάζουν τασεο-ανεξάρτητη δράση, ενώ ενεργοποιούνται χημειομηχανικά από αυξημένα ενδοκυτταρικά επίπεδα Ασβεστίου (σε εύρος μM), όπως συμβαίνει για παράδειγμα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Οι SK δίαυλοι προκαλούν το φαινόμενο της μεθυπερπόλωσης (sAHP) το οποίο περιορίζει την συχνότητα πυροδότησης του νευρώνα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Η υψηλή συγγένεια δέσμευσης του Ασβεστίου στους SK διαύλους οφείλεται στην ανεξάρτητη Ασβεστίου αλληλεπίδραση της SK α-υπομονάδας με το C-τελικό τμήμα της Καλμοδουλίνης (TR2C), ιδιότητα που χαρακτηρίζει τους SK διαύλους στην μεγάλη οικογένεια των διαύλων καλίου. Το TR2C τμήμα δεσμεύεται σε μια συγκεκριμένη περιοχή της α-υπομονάδας των SK διαύλων η οποία ονομάζεται CaMBD (CalModulin Binding Domain). Η περιοχή αυτή εντοπίζεται ενδοκυτταρικά στο ελικοειδές C-τελικό τμήμα της συγκεκριμένης υπομονάδας. Σε μια προσπάθεια μελέτης της αλληλεπίδρασης της ελεύθερης Ασβεστίου Καλμοδουλίνης και της CaMBD περιοχής, εφαρμόσαμε φασματοσκοπία NMR σε ένα χαρακτηριστικό της αλληλεπίδρασης σύμπλοκο, που αποτελούνταν από το C-τελικό τμήμα της Καλμοδουλίνης (TR2C) και ένα συνθετικό πεπτίδιο 23 αμινοξέων, αντιπροσωπευτικό της CaMBD περιοχής. Οι πειραματικές συνθήκες ρυθμίστηκαν με χρήση τεχνικών φθορισμομετρίας προκειμένου να καθοριστεί το βέλτιστο περιβάλλον για την αλληλεπίδραση. Η δομή της απο-Καλμοδουλίνης, σε αλληλεπίδραση με τo CaMBD τμήμα, μελετήθηκε με χρήση υψηλής ανάλυσης φασματοσκοπίας NMR (600 & 900 MHz) μέσω 2D και 3D πολυπηρυνικών (1Η, 13C, 15N) φασμάτων. Η χαρτογράφηση της διαταραχής των χημικών μετατοπίσεων στο υπό αλληλεπίδραση TR2C τμήμα αποκαλύπτει την επιφάνεια αλληλεπίδρασης μεταξύ TR2C και CaMBD τμήματος ενώ η αναλυτική δομική μελέτη οδηγεί σε μια NMR δομή για το TR2C τμήμα στο σύμπλοκο με το CaMBD τμήμα. Small conductance Ca2+-activated potassium (SK) channels are voltage independent, chemo-mechanically gated K+ channels, which utilize as their gating cue increases in the levels of intracellular Ca2+ such as occur during an action potential. SK channels underlie the slow afterhyperpolarization (sAHP) that limits the firing frequency during an action potential. SK channels are gated solely by intracellular Ca2+ in the submicromolar range. This high affinity for Ca2+ results from Ca2+-independent association of the SK α-subunit with calmodulin C-terminal domain (TR2C), a property unique among the large family of potassium channels. TR2C binds to a specific region of the α-subunit of SK channels called the CaM binding domain (CaMBD), located intracellular and immediately C-terminal to the inner helix. In an attempt to elucidate the interaction between apo-CaM and CaMBD we apply NMR Spectroscopy to a minimal complex consisting of the C-terminal domain of CaM and a synthetic 23-residue peptide corresponding to the CaMBD core region. Experimental conditions were fine-tuned through Fluorescence spectroscopy in order to identify the optimum conditions for this interaction. The structure of apo-CaM, complexed with the CaMBD, was studied by high analysis NMR spectroscopy (600 & 900 MHz) through 2D and 3D heteronuclear (1Η, 13C, 15N) spectra. Chemical shift variation mapped over the complexed apo-CaM with sk2 peptide reveals the interaction interface while the detailed conformational analysis results to an NMR solution structure. 2008-10-15T09:26:59Z 2008-10-15T09:26:59Z 2008-01-21 2008-10-15T09:26:59Z Thesis http://nemertes.lis.upatras.gr/jspui/handle/10889/1001 gr Η ΒΥΠ διαθέτει αντίτυπο της διατριβής σε έντυπη μορφή στο βιβλιοστάσιο διδακτορικών διατριβών που βρίσκεται στο ισόγειο του κτιρίου της. 0 application/pdf
institution	UPatras
collection	Nemertes
language	Greek
topic	Καλμοδουλίνη Δίαυλοι SK2 Μεθυπερπόλωση TR2C NMR 615.19
spellingShingle	Καλμοδουλίνη Δίαυλοι SK2 Μεθυπερπόλωση TR2C NMR 615.19 Κάνδιας, Νικόλαος NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
description	Οι ενεργοποιούμενοι από Ασβέστιο, μικρής αγωγιμότητας (SK), δίαυλοι καλίου παρουσιάζουν τασεο-ανεξάρτητη δράση, ενώ ενεργοποιούνται χημειομηχανικά από αυξημένα ενδοκυτταρικά επίπεδα Ασβεστίου (σε εύρος μM), όπως συμβαίνει για παράδειγμα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Οι SK δίαυλοι προκαλούν το φαινόμενο της μεθυπερπόλωσης (sAHP) το οποίο περιορίζει την συχνότητα πυροδότησης του νευρώνα κατά τη διάρκεια ενός δυναμικού ενέργειας. Η υψηλή συγγένεια δέσμευσης του Ασβεστίου στους SK διαύλους οφείλεται στην ανεξάρτητη Ασβεστίου αλληλεπίδραση της SK α-υπομονάδας με το C-τελικό τμήμα της Καλμοδουλίνης (TR2C), ιδιότητα που χαρακτηρίζει τους SK διαύλους στην μεγάλη οικογένεια των διαύλων καλίου. Το TR2C τμήμα δεσμεύεται σε μια συγκεκριμένη περιοχή της α-υπομονάδας των SK διαύλων η οποία ονομάζεται CaMBD (CalModulin Binding Domain). Η περιοχή αυτή εντοπίζεται ενδοκυτταρικά στο ελικοειδές C-τελικό τμήμα της συγκεκριμένης υπομονάδας. Σε μια προσπάθεια μελέτης της αλληλεπίδρασης της ελεύθερης Ασβεστίου Καλμοδουλίνης και της CaMBD περιοχής, εφαρμόσαμε φασματοσκοπία NMR σε ένα χαρακτηριστικό της αλληλεπίδρασης σύμπλοκο, που αποτελούνταν από το C-τελικό τμήμα της Καλμοδουλίνης (TR2C) και ένα συνθετικό πεπτίδιο 23 αμινοξέων, αντιπροσωπευτικό της CaMBD περιοχής. Οι πειραματικές συνθήκες ρυθμίστηκαν με χρήση τεχνικών φθορισμομετρίας προκειμένου να καθοριστεί το βέλτιστο περιβάλλον για την αλληλεπίδραση. Η δομή της απο-Καλμοδουλίνης, σε αλληλεπίδραση με τo CaMBD τμήμα, μελετήθηκε με χρήση υψηλής ανάλυσης φασματοσκοπίας NMR (600 & 900 MHz) μέσω 2D και 3D πολυπηρυνικών (1Η, 13C, 15N) φασμάτων. Η χαρτογράφηση της διαταραχής των χημικών μετατοπίσεων στο υπό αλληλεπίδραση TR2C τμήμα αποκαλύπτει την επιφάνεια αλληλεπίδρασης μεταξύ TR2C και CaMBD τμήματος ενώ η αναλυτική δομική μελέτη οδηγεί σε μια NMR δομή για το TR2C τμήμα στο σύμπλοκο με το CaMBD τμήμα.
author2	Σπυρούλιας, Γεώργιος
author_facet	Σπυρούλιας, Γεώργιος Κάνδιας, Νικόλαος
format	Thesis
author	Κάνδιας, Νικόλαος
author_sort	Κάνδιας, Νικόλαος
title	NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
title_short	NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
title_full	NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
title_fullStr	NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
title_full_unstemmed	NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου
title_sort	nmr μελέτη της αλληλεπίδρασης του c’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των sk2 διαύλων ιόντων καλίου
publishDate	2008
url	http://nemertes.lis.upatras.gr/jspui/handle/10889/1001
work_keys_str_mv	AT kandiasnikolaos nmrmeletētēsallēlepidrasēstouctelikoutmēmatostēskalmodoulinēskaienosantiprosōpeutikoupeptidiou23aminoxeōntōnsk2diaulōniontōnkaliou
_version_	1771297231210545152

NMR μελέτη της αλληλεπίδρασης του C’-τελικού τμήματος της καλμοδουλίνης και ενός αντιπροσωπευτικού πεπτιδίου 23 αμινοξέων των SK2 διαύλων ιόντων καλίου

Παρόμοια τεκμήρια