Περίληψη: | Τα τελευταία χρόνια υπάρχει έντονη ερευνητική δραστηριότητα γύρω από την ανάπτυξη νέων, ταχύτερων και πιο αξιόπιστων αναλυτικών μεθόδων και βιοαισθητήρων για την ταυτοποίηση ή τον ποσοτικό προσδιορισμό νουκλεϊκών οξέων.
Η παρούσα μεταπτυχιακή εργασία είχε ως στόχο την ανάπτυξη νέων βιοαισθητήρων DNA είτε για (α) τη γονοτύπιση μονονουκλεοτιδικών πολυμορφισμών είτε για (β) τον προσδιορισμό ειδικών αλληλουχιών νουκλεϊκών οξέων.
Πιο συγκεκριμένα, το Θεωρητικό Μέρος χωρίζεται σε τέσσερα κεφάλαια. Στο Κεφάλαιο 1 παρουσιάζεται γενικά η ανάλυση των νουκλεϊκών οξέων. Γίνεται εκτενής αναφορά στην αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) αλλά και στους τρόπους ανίχνευσης και ταυτοποίησης των προϊόντων της PCR. Στο κεφάλαιο 2 περιγράφεται ο όρος μονονουκλεοτιδικός πολυμορφισμός και παρουσιάζονται τρόποι γονοτύπισης των πολυμορφισμών αυτών. Στο κεφάλαιο 3 παρουσιάζονται οι χημειο(βιο)φωταυγείς ιχνηθέτες και ο τρόπος που χρησιμοποιούνται για την ανάλυση νουκλεϊκών οξέων. Τέλος στο Κεφάλαιο 4 γίνεται εκτενής περιγραφή των βιοαισθητήρων DNA και των τύπων που έχουν αναπτυχθεί μέχρι σήμερα.
Το πειραματικό μέρος χωρίζεται σε δύο κεφάλαια. Στο κεφάλαιο 5 παρουσιάζεται η ανάπτυξη βιοαισθητήρα ξηρών αντιδραστηρίων για την ανίχνευση μονονουκλεοτιδικών πολυμορφισμών με χρήση φαινομένου χημειοφωταύγειας. Περιγράφονται αναλυτικά όλα τα αντιδραστήρια και όργανα που χρησιμοποιήθηκαν, τα στάδια της μεθόδου καθώς και τα αποτελέσματα που προέκυψαν. Τέλος στο Κεφάλαιο 6 παρουσιάζονται οι μελέτες για την ανάπτυξη βιοαισθητήρα ξηρών αντιδραστηρίων για ανίχνευση ειδικών μονόκλωνων και δίκλωνων αλληλουχιών. Η ανάπτυξη χημειοφωταυγειομετρικών βιοαισθητήρων είναι ένας κλάδος που έχει αρχίσει τα τελευταία χρόνια να βρίσκει εφαρμογή στην αναλυτική χημεία και είναι η πρώτη φορά που χρησιμοποιείται για την ανάλυση νουκλεϊκών οξέων. Έτσι πιστεύουμε ότι η παρούσα μεταπτυχιακή εργασία συνέβαλλε και σε ερευνητικό επίπεδο.
|