Μελέτη του προτύπου έκφρασης του γονιδίου GemC1/Lynkeas χρησιμοποιώντας τη β- γαλακτοζιδάση ως γονίδιο αναφοράς

• Main Author: Φούντα, Κωνσταντίνα Μαρία
• Other Authors: Ταραβήρας, Σταύρος
• Format: Thesis
• Language: Greek
• Published: 2017
• Subjects: Λυγέας; β- γαλακτοζιδάση; πολυκροσσωτά επενδυματικά κύτταρα; GemC1; β- galactosidase; multiciliated ependymal cells; Geminin; 572.696

H οικογένεια των πρωτεϊνών Geminin αποτελείται από τις Geminin, GemC1/ Lynkeas και Mcidas. Οι τρεις αυτές πρωτεΐνες εμφανίζουν ομολογία στην περιοχή του σπειροειδούς σπειράματος, με την οποία δημιουργούν ομοδιμερή και ετεροδιμερή. Η Geminin είναι ένας αναστολέας της δημιουργίας του προαντιγραφικού συμπλόκου, ο Mcidas ρυθμίζει την αντιγραφή του DNA και την προώθηση του κυτταρικού κύκλου μέσω της σύνδεσής του με τη Geminin, ενώ ο GemC1/ Lynkeas μεσολαβεί τη δημιουργία του προεναρκτήριου συμπλόκου μέσω των αλληλεπιδράσεων με το TopBP1. Επίσης, εκτός από το ρόλο τους στον κυτταρικό κύκλο, η οικογένεια των Geminin εμπλέκεται στη ρύθμιση των αποφάσεων της κυτταρικής μοίρας. Πρόσφατες έρευνες από το εργαστήριο μας και από άλλα εργαστήρια, έδειξαν ότι ο McIdas ρυθμίζει τη διαφοροποίηση των πολυκροσσωτών κυττάρων στον εγκέφαλο και στο αναπνευστικό σύστημα. Επίσης, έχουμε δείξει ότι ο GemC1/ Lynkeas, επίσης, παίζει ρόλο στις αποφάσεις περιορισμού της μοίρας των νευρικών βλαστικών κυττάρων, καθορίζοντας με αυτό τον τρόπο την παραγωγή πολυκροσσωτών επενδυματικών κυττάρων στην υποεπενδυματική ζώνη του εγκεφάλου. Ο Mcidas και ο GemC1/ Lynkeas είναι σημαντικά συστατικά για τη διαφοροποίηση των πρόδρομων κυττάρων σε πολυκροσσωτά κύτταρα τόσο στον εγκέφαλο όσο και στον πνεύμονα. Πρόσφατα δεδομένα από την ανάλυση του McIdas και του GemC1/Lynkeas καταδεικνύουν πρόσθετες θέσεις έκφρασης στον αναπτυσσόμενο εγκέφαλο, στις οποίες περιλαμβάνονται η φλοιϊκή περιέλιξη (cortical hem), το χοριοειδές πλέγμα (choroid plexus) και η Eminentia thalami. Για να μελετήσουμε επιπλέον, το πρότυπο έκφρασης του GemC1/ Lynkeas τόσο στο χρόνο όσο και στο χώρο, χρησιμοποιήσαμε διαγονιδιακούς μυς με μια κασέτα αναφοράς μέσα στο γονίδιο του GemC1/ Lynkeas, το οποίο δημιουργεί μη λειτουργική πρωτεΐνη σε επίπεδο RNA. Με τη βοήθεια του γονιδίου LacZ της κασέτας, μπορούμε να αναλύσουμε την έκφραση του GemC1/ Lynkeas σε διαφορετικά αναπτυξιακά στάδια, τόσο σε έμβρυα όσο και σε νεογέννητα. O στόχος μας ήταν να χαρακτηρίσουμε λεπτομερώς το πρότυπο έκφρασης του GemC1/Lynkeas στον πρόσθιο εγκέφαλο μυών και να κατανοήσουμε το ρόλο του GemC1/Lynkeas. Μέχρι στιγμής, τα δεδομένα μας δείχνουν ότι ο GemC1/Lynkeas εκφράζεται σε περιοχές της μεσαίας γραμμής του αναπτυσσόμενου φλοιού εγκεφάλου, όπως η φλοιϊκή περιέλιξη, το χοριοειδές πλέγμα, η θαλαμική προεξοχή και η οριακή ζώνη. Σε αυτές τις περιοχές συνεντοπίζονται και οι πρώτοι δημιουργηθέντες νευρώνες, τα Cajal- Retzius cells. Συμπερασματικά, πιθανόν να υπάρχει πιθανή συσχέτιση της ύπαρξης των κυττάρων αυτών με την έκφραση του GemC1/ Lynkeas.