| Περίληψη: | Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF είναι ορφανό μέλος της υπεροικογένειας των πυρηνικών υποδοχέων. Στον αχινό, τόσο η μητρική πρωτεΐνη όσο και το μητρικό mRNA του Coup-TF είναι σημαντικά για πρώιμες αναπτυξιακές διαδικασίες, όπως ο καθορισμός των βλαστικών στιβάδων και των απογόνων τους. Σύμφωνα με παλαιότερα αποτελέσματα αυτού του εργαστηρίου, στα έμβρυα του αχινού Paracentrotus lividus, στα οποία έχει γίνει αποσιώπηση με morpholino ολιγονουκλεοτίδια του Coup-TF (Coup-TF morphants) απουσιάζουν το έντερο, ο σκελετός και οι νευρώνες. Επιπλέον έχει δειχθεί ότι τρία στοιχεία απόκρισης στην ανοδική περιοχή του γονιδίου Coup-TF μέσα σε μια περιοχή 320bp (στις θέσεις -453, -432 και -377) είναι αναγκαία και ικανά για την ιστοειδική ρύθμιση της εμβρυικής έκφρασης του γονιδίου Coup-TF στο κοιλιακό εξώδερμα (Kalampoki and Flytzanis, 2014). Σύμφωνα με αποτελέσματα του εργαστηρίου (Ανδριάνα Σταμοπούλου, MSc, 2015,) προτείνεται ότι οι μεταγραφικοί παράγοντες Otx, Hox7 και Hox11/13b είναι οι καταστολείς του Coup-TF στο ραχιαίο εξώδερμα προσδένοντας πιθανώς το στοιχείο στην θέση -377. Ο στόχος της παρούσας μεταπτυχιακής διατριβής είναι η μελέτη του ρόλου και της ρύθμισης του γονιδίου Coup-TF στον αχινό Paracentrotus lividus. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν πως σε Coup-TF morphants τα γονίδια περιορισμού της κυτταρικής ταυτότητας του πρόσθιου νευροεξωδέρματος (ΑΝΕ), six3 και pax6, υπερεκφράζονται ενώ γονίδια δείκτες της βλεφαριδωτής ζώνης, foxG και otx, αποσιωπώνται. Αυτό οδηγεί στο συμπέρασμα ότι όταν καταστέλεται ο Coup-TF καμία από τις δύο νευρογενείς περιοχές του εμβρύου δεν καθορίζεται. Στον αντίποδα, γονίδια όπως το nodal και το bmp2/4, των οποίων η σηματοδότηση καθιερώνει τον κοιλιακό/ραχιαίο άξονα του εμβρύου, εκφράζονται φυσιολογικά στο κοιλιακό εξώδερμα, ενώ το γονίδιο chordin εκφράζεται εκτοπικά σε όλο το εξώδερμα. Γονίδια δείκτες του κοιλιακού εξωδέρματος, όπως τα lim-1, rfx3, gsc και eve, εκφράζονται ή υπερεκφράζονται ενώ γονίδια δείκτες του ραχιαίου εξωδέρματος αποσιωπώνται. Υπερέκφραση παρουσιάζει και το γονίδιο δείκτης του κοιλιακού εξωδέρματος, EctoV. Συμπερασματικά ως προς τον ρόλο του Coup-TF, προτείνουμε ότι τα μητρικά επίπεδα του Coup-TF είναι απαραίτητα για την φυσιολογική εμβρυική σηματοδότηση κατά μήκος των ζωικού/φυτικού και κοιλιακού/ραχιαίου αξόνων. Ο ποσοτικός περιορισμός του παράγοντα Coup-TF οδηγεί σε επέκταση του κοιλιακού εξωδέρματος (ventralization), πιθανώς ως αποτέλεσμα της υπερέκφρασης της chordin, εμποδίζοντας την νευρωνική διαφοροποίηση και τον καθορισμό του ραχιαίου εξωδέρματος από την Bmp2/4 σηματοδότηση. Ως προς την ρύθμιση του Coup-TF τα αποτελέσματά μας καταλήγουν στο συμπέρασμα ότι η Bmp2/4 σηματοδότηση περιορίζει την έκφραση του γονιδίου στο κοιλιακό εξώδερμα, μέσω ενεργοποίησης των καταστολέων IrxA και Hox7 στο ραχιαίο εξώδερμα. Επιπλέον τα αποτελέσματά μας επιβεβαιώνουν την καταστολή του Coup-TF από τον Otx στην ίδια περιοχή και προτείνουν τον FoxK ως πιθανό ενεργοποιητή του στο κοιλιακό εξώδερμα. Τέλος συμπεραίνουμε, πως η ρύθμιση του Coup-TF στο ενδόδερμα βρίσκεται κάτω από την επίδραση της Wnt σηματοδότησης, όπως υποδεικνύεται από την επέκταση της έκφρασης του σε έμβρυα τα οποία έχουν αναπτυχθεί παρουσία LiCl, όπου η Wnt σηματοδότηση είναι ενεργή εκτοπικά.
|
|---|
