| Περίληψη: | Η νευρογένεση είναι μία περίπλοκη αναπτυξιακή διαδικασία που έχει μελετηθεί σε πλειάδα οργανισμών. Στους αχινούς, τα ρυθμιστικά γονιδιακά δίκτυα (GRN) του στοματικού εξωδέρματος (ΟΕ) και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος (ΑΝΕ), όπου λαμβάνει χώρα η εμβρυική νευρική ανάπτυξη, έχουν ξεκινήσει να αναλύονται πρόσφατα. Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF αποτελεί ορφανό μέλος της υπεροι-κογένειας των θυρεοειδών / στεροειδών υποδοχέων και αποτελεί παράγοντα απαραί-τητο για τη νευρογένεση στον αχινό και όχι μόνο. Εκφράζεται στις περιοχές του στομα-τικού εξωδέρματος, της βλεφαριδωτής ζώνη και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος, περιοχές όπου εκφράζονται σημαντικά νευρογενή γονίδια, όπως ο Six3, o FoxQ2 και ο SoxC. Στη παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκαν τα πρότυπα έκφρασης γονι-δίων του νευρογενούς GRN, των SoxC, Six3, Hbn, Sip1 και Fez στα πρώιμα αναπτυξιακά στάδια του αχινού Paracentrotus lividus, καθώς και η επίδραση της καταστολής σημαντικών γονιδίων για την ανάπτυξη του εμβρυικού νευρικού συστήματος, των PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2, στο πρότυπο έκφρασης των γονιδίων αυτών.
Με τη χρήση κλασσικών μεθόδων Μοριακής Βιολογίας, κατασκευάστηκαν ειδικοί RNA αντινοηματικούς ιχνηθέτες για τα mRNA των υπό μελέτη γονιδίων, οι οποίοι χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση του ιστοειδικού προτύπου έκφρασης στα έμβρυα του πετραχινού με τη διαδικασία της in situ υβριδοποίησης. Έπειτα, για τη διευκρίνιση της θέσης των γονιδίων μέσα στο GRN, αλλά και τις αλληλεπιδράσεις των γονιδίων με τα PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2 στο νευρογενές γονιδιακό δίκτυο, πραγματοποιήθηκαν in situ υβριδοποιήσεις με τη χρήση των παραπάνω RNA ιχνηθετών σε έμβρυα στα οποία η έκφραση των PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2 έχει κατασταλεί με morpholino αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια. Τα απο-τελέσματα των παραπάνω πειραμάτων έδειξαν ότι το SoxC αποτελεί άριστο μάρτυρα προγονικών και μερικώς καθορισμένων νευρικών κυττάρων και η δράση του δεν εξαρτάται σημαντικά από κανένα από τα κατεσταλμένα μόρια. Επίσης, ο Coup-TF φαίνεται να έχει σημαντικό ρόλο στο καθορισμό των σεροτονεργικών νευρώνων, καθώς η καταστολή του οδηγεί σε απώλεια έκφρασης γονιδίων διαφοροποίησης των νευρώνων αυτών, καθώς σε συνδυασμό με αδημοσίευτα πειράματα του εργαστηρίου, η καταστολή οδηγεί σε μερική αλλαγή της ταυτότητας της κεντρικής περιοχής του ΑΝΕ προς στοματικό εξώδερμα που εκφράζει μερικά νευρογενή μόρια, π.χ. FoxQ2.
|
|---|
