Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus
Η νευρογένεση είναι μία περίπλοκη αναπτυξιακή διαδικασία που έχει μελετηθεί σε πλειάδα οργανισμών. Στους αχινούς, τα ρυθμιστικά γονιδιακά δίκτυα (GRN) του στοματικού εξωδέρματος (ΟΕ) και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος (ΑΝΕ), όπου λαμβάνει χώρα η εμβρυική νευρική ανάπτυξη, έχουν ξεκινήσει να αναλύοντα...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2018
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/11044 |
| id |
nemertes-10889-11044 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Αναπτυξιακή βιολογία Αχινός Νευρογένεση Developmental biology Sea urchin Neurogenesis CoupTF 593.95 |
| spellingShingle |
Αναπτυξιακή βιολογία Αχινός Νευρογένεση Developmental biology Sea urchin Neurogenesis CoupTF 593.95 Τσίμπος, Παναγιώτης Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus |
| description |
Η νευρογένεση είναι μία περίπλοκη αναπτυξιακή διαδικασία που έχει μελετηθεί σε πλειάδα οργανισμών. Στους αχινούς, τα ρυθμιστικά γονιδιακά δίκτυα (GRN) του στοματικού εξωδέρματος (ΟΕ) και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος (ΑΝΕ), όπου λαμβάνει χώρα η εμβρυική νευρική ανάπτυξη, έχουν ξεκινήσει να αναλύονται πρόσφατα. Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF αποτελεί ορφανό μέλος της υπεροι-κογένειας των θυρεοειδών / στεροειδών υποδοχέων και αποτελεί παράγοντα απαραί-τητο για τη νευρογένεση στον αχινό και όχι μόνο. Εκφράζεται στις περιοχές του στομα-τικού εξωδέρματος, της βλεφαριδωτής ζώνη και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος, περιοχές όπου εκφράζονται σημαντικά νευρογενή γονίδια, όπως ο Six3, o FoxQ2 και ο SoxC. Στη παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκαν τα πρότυπα έκφρασης γονι-δίων του νευρογενούς GRN, των SoxC, Six3, Hbn, Sip1 και Fez στα πρώιμα αναπτυξιακά στάδια του αχινού Paracentrotus lividus, καθώς και η επίδραση της καταστολής σημαντικών γονιδίων για την ανάπτυξη του εμβρυικού νευρικού συστήματος, των PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2, στο πρότυπο έκφρασης των γονιδίων αυτών.
Με τη χρήση κλασσικών μεθόδων Μοριακής Βιολογίας, κατασκευάστηκαν ειδικοί RNA αντινοηματικούς ιχνηθέτες για τα mRNA των υπό μελέτη γονιδίων, οι οποίοι χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση του ιστοειδικού προτύπου έκφρασης στα έμβρυα του πετραχινού με τη διαδικασία της in situ υβριδοποίησης. Έπειτα, για τη διευκρίνιση της θέσης των γονιδίων μέσα στο GRN, αλλά και τις αλληλεπιδράσεις των γονιδίων με τα PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2 στο νευρογενές γονιδιακό δίκτυο, πραγματοποιήθηκαν in situ υβριδοποιήσεις με τη χρήση των παραπάνω RNA ιχνηθετών σε έμβρυα στα οποία η έκφραση των PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2 έχει κατασταλεί με morpholino αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια. Τα απο-τελέσματα των παραπάνω πειραμάτων έδειξαν ότι το SoxC αποτελεί άριστο μάρτυρα προγονικών και μερικώς καθορισμένων νευρικών κυττάρων και η δράση του δεν εξαρτάται σημαντικά από κανένα από τα κατεσταλμένα μόρια. Επίσης, ο Coup-TF φαίνεται να έχει σημαντικό ρόλο στο καθορισμό των σεροτονεργικών νευρώνων, καθώς η καταστολή του οδηγεί σε απώλεια έκφρασης γονιδίων διαφοροποίησης των νευρώνων αυτών, καθώς σε συνδυασμό με αδημοσίευτα πειράματα του εργαστηρίου, η καταστολή οδηγεί σε μερική αλλαγή της ταυτότητας της κεντρικής περιοχής του ΑΝΕ προς στοματικό εξώδερμα που εκφράζει μερικά νευρογενή μόρια, π.χ. FoxQ2. |
| author2 |
Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος |
| author_facet |
Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Τσίμπος, Παναγιώτης |
| format |
Thesis |
| author |
Τσίμπος, Παναγιώτης |
| author_sort |
Τσίμπος, Παναγιώτης |
| title |
Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_short |
Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_full |
Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_fullStr |
Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_full_unstemmed |
Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_sort |
ο coup-tf και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού paracentrotus lividus |
| publishDate |
2018 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/11044 |
| work_keys_str_mv |
AT tsimpospanagiōtēs ocouptfkaitaprogonikaneurikakyttarastoembryotouachinouparacentrotuslividus AT tsimpospanagiōtēs couptfandprecursorneuronalcellsintheparacentrotuslividusseaurchinembryo |
| _version_ |
1771297358081949696 |
| spelling |
nemertes-10889-110442022-09-05T20:20:28Z Ο Coup-TF και τα προγονικά νευρικά κύτταρα στο έμβρυο του αχινού Paracentrotus lividus Coup-TF and precursor neuronal cells in the Paracentrotus lividus sea urchin embryo Τσίμπος, Παναγιώτης Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Κατσώρης, Παναγιώτης Καζάνης, Ηλίας Tsibos, Panagiotis Αναπτυξιακή βιολογία Αχινός Νευρογένεση Developmental biology Sea urchin Neurogenesis CoupTF 593.95 Η νευρογένεση είναι μία περίπλοκη αναπτυξιακή διαδικασία που έχει μελετηθεί σε πλειάδα οργανισμών. Στους αχινούς, τα ρυθμιστικά γονιδιακά δίκτυα (GRN) του στοματικού εξωδέρματος (ΟΕ) και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος (ΑΝΕ), όπου λαμβάνει χώρα η εμβρυική νευρική ανάπτυξη, έχουν ξεκινήσει να αναλύονται πρόσφατα. Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF αποτελεί ορφανό μέλος της υπεροι-κογένειας των θυρεοειδών / στεροειδών υποδοχέων και αποτελεί παράγοντα απαραί-τητο για τη νευρογένεση στον αχινό και όχι μόνο. Εκφράζεται στις περιοχές του στομα-τικού εξωδέρματος, της βλεφαριδωτής ζώνη και του πρόσθιου νευροεξωδέρματος, περιοχές όπου εκφράζονται σημαντικά νευρογενή γονίδια, όπως ο Six3, o FoxQ2 και ο SoxC. Στη παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκαν τα πρότυπα έκφρασης γονι-δίων του νευρογενούς GRN, των SoxC, Six3, Hbn, Sip1 και Fez στα πρώιμα αναπτυξιακά στάδια του αχινού Paracentrotus lividus, καθώς και η επίδραση της καταστολής σημαντικών γονιδίων για την ανάπτυξη του εμβρυικού νευρικού συστήματος, των PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2, στο πρότυπο έκφρασης των γονιδίων αυτών. Με τη χρήση κλασσικών μεθόδων Μοριακής Βιολογίας, κατασκευάστηκαν ειδικοί RNA αντινοηματικούς ιχνηθέτες για τα mRNA των υπό μελέτη γονιδίων, οι οποίοι χρησιμοποιήθηκαν για την ανάλυση του ιστοειδικού προτύπου έκφρασης στα έμβρυα του πετραχινού με τη διαδικασία της in situ υβριδοποίησης. Έπειτα, για τη διευκρίνιση της θέσης των γονιδίων μέσα στο GRN, αλλά και τις αλληλεπιδράσεις των γονιδίων με τα PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2 στο νευρογενές γονιδιακό δίκτυο, πραγματοποιήθηκαν in situ υβριδοποιήσεις με τη χρήση των παραπάνω RNA ιχνηθετών σε έμβρυα στα οποία η έκφραση των PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta και PlFoxQ2 έχει κατασταλεί με morpholino αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια. Τα απο-τελέσματα των παραπάνω πειραμάτων έδειξαν ότι το SoxC αποτελεί άριστο μάρτυρα προγονικών και μερικώς καθορισμένων νευρικών κυττάρων και η δράση του δεν εξαρτάται σημαντικά από κανένα από τα κατεσταλμένα μόρια. Επίσης, ο Coup-TF φαίνεται να έχει σημαντικό ρόλο στο καθορισμό των σεροτονεργικών νευρώνων, καθώς η καταστολή του οδηγεί σε απώλεια έκφρασης γονιδίων διαφοροποίησης των νευρώνων αυτών, καθώς σε συνδυασμό με αδημοσίευτα πειράματα του εργαστηρίου, η καταστολή οδηγεί σε μερική αλλαγή της ταυτότητας της κεντρικής περιοχής του ΑΝΕ προς στοματικό εξώδερμα που εκφράζει μερικά νευρογενή μόρια, π.χ. FoxQ2. Neurogenesis is a complex developmental process that has been researched in a multitude of organisms. In sea urchins, the gene regulatory networks (GRN) of oral ectoderm (OE) and anterior neuroectoderm (ANE), where embryonic neural development takes place, have recently started to be analyzed. The Coup-TF transcription factor is an orphan member of the thyroid / steroid receptor superfamily and play a pivotal role in neurogenesis in the sea urchin embryo and not only in this process. It is expressed in the oral ectoderm, the ciliary band and the ANE, areas in which several neurogenic factors are express, such as Six3, FoxQ2 and SoxC. In this dissertation, the expression profiles of the genes SoxC, Six3, Hbn, Sip1 and Fez have been examined in the early embryonic stages of the sea urchin Paracentrotus lividus, as well as the changes in their expression profiles when master genes, PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta and PlFoxQ2, that regulate the development of the embryonic nervous system, are knocked down. Using classic methods of Molecular Biology, RNA antisense probes have been developed, specific for the genes in interest, which have, then, been used for the analysis of the spatiotemporal expression profiles of these genes in sea urchin embryos by in situ hybridization. Moreover, for the positioning of the aforementioned genes in the neurogenic GRN, as well as their interactions with PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta and PlFoxQ2, in situ hybridizations have been performed using the developed RNA probes in morpholino oligonucleotide – injected embryos where PlCoup-TF, PlSix3, PlDelta and PlFoxQ2 have been knocked down. Results showed that SoxC is an excellent pan-neural marker for precursor and early specified neuronal cells and its expression is not dependent on neither of the knocked down factors. Additionally, Coup-TF seems to play a crucial role in the specification of the serotonergic neurons of the sea urchin embryo, as its downregulation leads to expression changes of genes important for the differentiation of these type of neurons. Finally, in conjunction with unpublished data from our lab, knocking down Coup-TF seems to lead to a change of fate of the central area of the ANE to an oral ectodermal state, but with some cells expressing neurogenic factors, such as FoxQ2. 2018-02-15T10:50:18Z 2018-02-15T10:50:18Z 2017-09-10 Thesis http://hdl.handle.net/10889/11044 gr 0 application/pdf |
