| Περίληψη: | Στην παρούσα διπλωματική εργασία ειδικές τεχνικές που αφορούν δύο ιικές πρωτεΐνες, την πρωτεάση 3C του ιού Coxsackie B3 και την περιοχή μεθυλτρανσφεράσης της πρωτεΐνης NS5 του ιού Dengue 3 πραγματοποιήθηκαν, όπως η απομόνωση, η κρυστάλλωση και ο αρχικός δομικός χαρακτηρισμός μέσω της ανάλυσης XRPD. Επιπλέον, διεξήχθη μελέτη για την επίδραση του οργανικού προσδέτη 4-χλωρορεσορσινόλη στη δομή της ανθρώπινης ινσουλίνης, μέσω περίθλασης ακτίνων Χ από πολυκρυσταλλικό υλικό (XRPD).
Μοριακές τεχνικές, όπως ο μετασχηματισμός και η καλλιέργεια βακτηριακών κυττάρων, η αποδιατακτική ηλεκτροφόρηση και η χρωματογραφία FPLC χρησιμοποιήθηκαν για την έκφραση και την απομόνωση των δύο ιικών πρωτεϊνών. Η διεργασία κρυστάλλωσης διεξήχθη σε ένα εύρος pH, μέσω της μεθόδου Batch. Τα πολυκρυσταλλικά ιζήματα που σχηματίστηκαν, χρησιμοποιήθηκαν αργότερα για μετρήσεις XRPD χρησιμοποιώντας εργαστηριακές υποδομές και ακτινοβολία Synchrotron. Η ανάλυση δεδομένων αποκάλυψε ότι οι κρύσταλλοι της πρωτεάσης 3C ανήκουν σε μονοκλινή συμμετρία, ενώ οι κρύσταλλοι του τομέα μεθυλτρανσφεράσης ανήκουν στην ορθορομβική συμμετρία. Αυτά είναι προκαταρκτικά βήματα προς τον επιτυχή προσδιορισμό της δομής αυτών των ιικών πρωτεϊνών, καθώς και τον προσδιορισμό των μορίων που προσδένονται σε αυτές. Το τελευταίο θα ενισχύσει τη διαδικασία παραγωγής στοχευμένων φαρμάκων έναντι δύο σημαντικών ιών που αναμένεται να προκαλέσουν επιδημίες στο μέλλον.
Σε συνέχεια προηγούμενων μελετών σχετικά με την ανθρώπινη ινσουλίνη από την ομάδα μας, ερευνήσαμε την επίδραση του προσδέτη 4-χλωρορεσορσινόλη σε δομικά μοτίβα ανθρώπινης ινσουλίνης, που συμπλέκονται με τον προσδέτη. Πειράματα κρυστάλλωσης διεξήχθησαν υπό συστηματική μεταβολή του pH, παρουσία ιόντων ψευδαργύρου. Ακολούθως, τα πολυκρυσταλλικά ιζήματα, τα οποία σχηματίστηκαν, χρησιμοποιήθηκαν για μετρήσεις XRPD. Τέσσερα διαφορετικά πολύμορφα ινσουλίνης εντοπίστηκαν από την ανάλυση δεδομένων. Τέλος, παράγονται και χαρακτηρίζονται τέσσερις διαφορετικές κρυσταλλικές φάσεις μονοκλινούς συμμετρίας, μείζονος φαρμακευτικού ενδιαφέροντος.
Ο κύριος σκοπός αυτής της έρευνας είναι να υπογραμμίσει τη σημασία της ανάλυσης XRPD ως πολύτιμου ερευνητικού εργαλείου σε επιστημονικούς τομείς, όπως η ιολογία, ο σχεδιασμός δομών φαρμάκων και η δομική βιολογία.
|
|---|
