Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω...
Κύριος συγγραφέας: | |
---|---|
Άλλοι συγγραφείς: | |
Μορφή: | Thesis |
Γλώσσα: | Greek |
Έκδοση: |
2018
|
Θέματα: | |
Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/11440 |
id |
nemertes-10889-11440 |
---|---|
record_format |
dspace |
spelling |
nemertes-10889-114402022-09-05T06:57:50Z Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης Modified insulin derivates Ζαπαντιώτη, Ευσταθία Μπάρλος, Κλεομένης Γάτος, Δημήτριος Τσέλιος, Θεόδωρος Zapantioti, Efstathia Ινσουλίνη 2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη Πενταφθοροφαινυλεστέρας Πεπτίδια Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση Insulin 2-chlorotrityl resin Pentafluorophenyl ester Peptides Peptide synthesis in solid phase 572.565 Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω του τριπεπτιδίου Arg-Arg-Gly, με στόχο τη δημιουργία παραγώγου με αυξημένη ενζυμική σταθερότητα και διάρκεια δράσης. Οι κατάλληλα προστατευμένες Α- και Β- αλυσίδες παρασκευάσθηκαν με step by step σύνθεση επί της 2-χλωροτριτυλο ρητίνης, ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Στην περίπτωση της Α-αλυσίδας η σύνθεση πραγματοποιήθηκε με προσκόλληση αρχικά της Fmoc-Gly-OH επί της ρητίνης μέσω της α-καρβοξυλομάδας. Η σύνθεση της Β-αλυσίδας πραγματοποιήθηκε με αρχική προσκόλληση της Fmoc-Thr(tBu)-OH και δεύτερη προσκόλληση της Fmoc-Lys(Mmt)-OH. H Mmt ομάδα απομακρύνθηκε εκλεκτικά με 1,5 % TFA, ταυτόχρονα με την διάσπαση της προστατευμένης Β-αλυσίδας από τη ρητίνη. Η διασύνδεση των δύο αλυσίδων πραγματοποιήθηκε σε υγρή φάση με συμπύκνωση (fragment condensation) του Pfp-εστέρα της προστατευμένης Α-αλυσίδας με τη Β-αλυσίδα. Ακολούθησε αποπροστασία και οξείδωση δύο σταδίων του σχηματιζόμενου προϊόντος της συμπύκνωσης, με σκοπό το σχηματισμό των δισουλφιδικών δεσμών, απομόνωση και καθαρισμός του επιθυμητού τελικού προϊόντος. Ο έλεγχος της καθαρότητας των τελικών προϊόντων έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (RP-HPLC) και η ταυτοποίησή τους με φασματομετρία μάζας (ESI-MS). In the present postgraduate dissertation, the synthesis of a triple bridged human insulin derivative was carried out in which chains A and B were crosslinked in addition to the two disulfide bonds with an amide bond between the side chains of Glu (A21) and Lys (B29) via the Arg-Arg-Gly tripeptide, in order to synthesize a derivative with increased enzyme stability and duration of action. Appropriately protected A- and B- chains were prepared with step by step synthesis on the 2-chlorotrityl resin, following the Fmoc / tBu methodology. The synthesis of the A-chain was accomplished by first adhering Fmoc-Gly-OH to the resin via the α-carboxyl group. The synthesis of the B-chain was performed by first adhering Fmoc-Thr(tBu)-OH and second adhering Fmoc-Lys (Mmt)-OH. The Mmt group was selectively removed with 1.5% TFA, simultaneously with cleavage of the protected B-chain from the resin. The crosslinking of the two chains was performed in liquid phase by fragment condensation of the protected Pfp-ester of the A-chain with the B-chain. There followed deprotection and oxidation of two stages of the formed product of the condensation to form disulfide bonds, isolation and purification of the desired final product. The purity control of the final product was performed by high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and their identification by mass spectrometry (ESI-MS). 2018-07-12T09:39:55Z 2018-07-12T09:39:55Z 2017 Thesis http://hdl.handle.net/10889/11440 gr 12 application/pdf |
institution |
UPatras |
collection |
Nemertes |
language |
Greek |
topic |
Ινσουλίνη 2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη Πενταφθοροφαινυλεστέρας Πεπτίδια Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση Insulin 2-chlorotrityl resin Pentafluorophenyl ester Peptides Peptide synthesis in solid phase 572.565 |
spellingShingle |
Ινσουλίνη 2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη Πενταφθοροφαινυλεστέρας Πεπτίδια Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση Insulin 2-chlorotrityl resin Pentafluorophenyl ester Peptides Peptide synthesis in solid phase 572.565 Ζαπαντιώτη, Ευσταθία Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
description |
Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω του τριπεπτιδίου Arg-Arg-Gly, με στόχο τη δημιουργία παραγώγου με αυξημένη ενζυμική σταθερότητα και διάρκεια δράσης. Οι κατάλληλα προστατευμένες Α- και Β- αλυσίδες παρασκευάσθηκαν με step by step σύνθεση επί της 2-χλωροτριτυλο ρητίνης, ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Στην περίπτωση της Α-αλυσίδας η σύνθεση πραγματοποιήθηκε με προσκόλληση αρχικά της Fmoc-Gly-OH επί της ρητίνης μέσω της α-καρβοξυλομάδας. Η σύνθεση της Β-αλυσίδας πραγματοποιήθηκε με αρχική προσκόλληση της Fmoc-Thr(tBu)-OH και δεύτερη προσκόλληση της Fmoc-Lys(Mmt)-OH. H Mmt ομάδα απομακρύνθηκε εκλεκτικά με 1,5 % TFA, ταυτόχρονα με την διάσπαση της προστατευμένης Β-αλυσίδας από τη ρητίνη. Η διασύνδεση των δύο αλυσίδων πραγματοποιήθηκε σε υγρή φάση με συμπύκνωση (fragment condensation) του Pfp-εστέρα της προστατευμένης Α-αλυσίδας με τη Β-αλυσίδα. Ακολούθησε αποπροστασία και οξείδωση δύο σταδίων του σχηματιζόμενου προϊόντος της συμπύκνωσης, με σκοπό το σχηματισμό των δισουλφιδικών δεσμών, απομόνωση και καθαρισμός του επιθυμητού τελικού προϊόντος. Ο έλεγχος της καθαρότητας των τελικών προϊόντων έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (RP-HPLC) και η ταυτοποίησή τους με φασματομετρία μάζας (ESI-MS). |
author2 |
Μπάρλος, Κλεομένης |
author_facet |
Μπάρλος, Κλεομένης Ζαπαντιώτη, Ευσταθία |
format |
Thesis |
author |
Ζαπαντιώτη, Ευσταθία |
author_sort |
Ζαπαντιώτη, Ευσταθία |
title |
Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
title_short |
Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
title_full |
Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
title_fullStr |
Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
title_full_unstemmed |
Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
title_sort |
τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης |
publishDate |
2018 |
url |
http://hdl.handle.net/10889/11440 |
work_keys_str_mv |
AT zapantiōtēeustathia tropopoiēmenaparagōgainsoulinēs AT zapantiōtēeustathia modifiedinsulinderivates |
_version_ |
1771297163222974464 |