Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης

• Κύριος συγγραφέας: Ζαπαντιώτη, Ευσταθία
• Άλλοι συγγραφείς: Μπάρλος, Κλεομένης
• Μορφή: Thesis
• Γλώσσα: Greek
• Έκδοση: 2018
• Θέματα: Ινσουλίνη; 2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη; Πενταφθοροφαινυλεστέρας; Πεπτίδια; Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση; Insulin; 2-chlorotrityl resin; Pentafluorophenyl ester; Peptides; Peptide synthesis in solid phase; 572.565

Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω του τριπεπτιδίου Arg-Arg-Gly, με στόχο τη δημιουργία παραγώγου με αυξημένη ενζυμική σταθερότητα και διάρκεια δράσης. Οι κατάλληλα προστατευμένες Α- και Β- αλυσίδες παρασκευάσθηκαν με step by step σύνθεση επί της 2-χλωροτριτυλο ρητίνης, ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Στην περίπτωση της Α-αλυσίδας η σύνθεση πραγματοποιήθηκε με προσκόλληση αρχικά της Fmoc-Gly-OH επί της ρητίνης μέσω της α-καρβοξυλομάδας. Η σύνθεση της Β-αλυσίδας πραγματοποιήθηκε με αρχική προσκόλληση της Fmoc-Thr(tBu)-OH και δεύτερη προσκόλληση της Fmoc-Lys(Mmt)-OH. H Mmt ομάδα απομακρύνθηκε εκλεκτικά με 1,5 % TFA, ταυτόχρονα με την διάσπαση της προστατευμένης Β-αλυσίδας από τη ρητίνη. Η διασύνδεση των δύο αλυσίδων πραγματοποιήθηκε σε υγρή φάση με συμπύκνωση (fragment condensation) του Pfp-εστέρα της προστατευμένης Α-αλυσίδας με τη Β-αλυσίδα. Ακολούθησε αποπροστασία και οξείδωση δύο σταδίων του σχηματιζόμενου προϊόντος της συμπύκνωσης, με σκοπό το σχηματισμό των δισουλφιδικών δεσμών, απομόνωση και καθαρισμός του επιθυμητού τελικού προϊόντος. Ο έλεγχος της καθαρότητας των τελικών προϊόντων έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (RP-HPLC) και η ταυτοποίησή τους με φασματομετρία μάζας (ESI-MS).