Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης

Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω...

Πλήρης περιγραφή

Λεπτομέρειες βιβλιογραφικής εγγραφής
Κύριος συγγραφέας: Ζαπαντιώτη, Ευσταθία
Άλλοι συγγραφείς: Μπάρλος, Κλεομένης
Μορφή: Thesis
Γλώσσα:Greek
Έκδοση: 2018
Θέματα:
Διαθέσιμο Online:http://hdl.handle.net/10889/11440
id nemertes-10889-11440
record_format dspace
spelling nemertes-10889-114402022-09-05T06:57:50Z Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης Modified insulin derivates Ζαπαντιώτη, Ευσταθία Μπάρλος, Κλεομένης Γάτος, Δημήτριος Τσέλιος, Θεόδωρος Zapantioti, Efstathia Ινσουλίνη 2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη Πενταφθοροφαινυλεστέρας Πεπτίδια Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση Insulin 2-chlorotrityl resin Pentafluorophenyl ester Peptides Peptide synthesis in solid phase 572.565 Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω του τριπεπτιδίου Arg-Arg-Gly, με στόχο τη δημιουργία παραγώγου με αυξημένη ενζυμική σταθερότητα και διάρκεια δράσης. Οι κατάλληλα προστατευμένες Α- και Β- αλυσίδες παρασκευάσθηκαν με step by step σύνθεση επί της 2-χλωροτριτυλο ρητίνης, ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Στην περίπτωση της Α-αλυσίδας η σύνθεση πραγματοποιήθηκε με προσκόλληση αρχικά της Fmoc-Gly-OH επί της ρητίνης μέσω της α-καρβοξυλομάδας. Η σύνθεση της Β-αλυσίδας πραγματοποιήθηκε με αρχική προσκόλληση της Fmoc-Thr(tBu)-OH και δεύτερη προσκόλληση της Fmoc-Lys(Mmt)-OH. H Mmt ομάδα απομακρύνθηκε εκλεκτικά με 1,5 % TFA, ταυτόχρονα με την διάσπαση της προστατευμένης Β-αλυσίδας από τη ρητίνη. Η διασύνδεση των δύο αλυσίδων πραγματοποιήθηκε σε υγρή φάση με συμπύκνωση (fragment condensation) του Pfp-εστέρα της προστατευμένης Α-αλυσίδας με τη Β-αλυσίδα. Ακολούθησε αποπροστασία και οξείδωση δύο σταδίων του σχηματιζόμενου προϊόντος της συμπύκνωσης, με σκοπό το σχηματισμό των δισουλφιδικών δεσμών, απομόνωση και καθαρισμός του επιθυμητού τελικού προϊόντος. Ο έλεγχος της καθαρότητας των τελικών προϊόντων έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (RP-HPLC) και η ταυτοποίησή τους με φασματομετρία μάζας (ESI-MS). In the present postgraduate dissertation, the synthesis of a triple bridged human insulin derivative was carried out in which chains A and B were crosslinked in addition to the two disulfide bonds with an amide bond between the side chains of Glu (A21) and Lys (B29) via the Arg-Arg-Gly tripeptide, in order to synthesize a derivative with increased enzyme stability and duration of action. Appropriately protected A- and B- chains were prepared with step by step synthesis on the 2-chlorotrityl resin, following the Fmoc / tBu methodology. The synthesis of the A-chain was accomplished by first adhering Fmoc-Gly-OH to the resin via the α-carboxyl group. The synthesis of the B-chain was performed by first adhering Fmoc-Thr(tBu)-OH and second adhering Fmoc-Lys (Mmt)-OH. The Mmt group was selectively removed with 1.5% TFA, simultaneously with cleavage of the protected B-chain from the resin. The crosslinking of the two chains was performed in liquid phase by fragment condensation of the protected Pfp-ester of the A-chain with the B-chain. There followed deprotection and oxidation of two stages of the formed product of the condensation to form disulfide bonds, isolation and purification of the desired final product. The purity control of the final product was performed by high performance liquid chromatography (RP-HPLC) and their identification by mass spectrometry (ESI-MS). 2018-07-12T09:39:55Z 2018-07-12T09:39:55Z 2017 Thesis http://hdl.handle.net/10889/11440 gr 12 application/pdf
institution UPatras
collection Nemertes
language Greek
topic Ινσουλίνη
2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη
Πενταφθοροφαινυλεστέρας
Πεπτίδια
Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση
Insulin
2-chlorotrityl resin
Pentafluorophenyl ester
Peptides
Peptide synthesis in solid phase
572.565
spellingShingle Ινσουλίνη
2-χλωροτρίτυλο-ρητίνη
Πενταφθοροφαινυλεστέρας
Πεπτίδια
Πεπτιδική σύνθεση σε στέρεα φάση
Insulin
2-chlorotrityl resin
Pentafluorophenyl ester
Peptides
Peptide synthesis in solid phase
572.565
Ζαπαντιώτη, Ευσταθία
Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
description Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, πραγματοποιήθηκε η σύνθεση ενός τριπλά γεφυρωμένου παραγώγου της ανθρώπινης ινσουλίνης, στο οποίο οι αλυσίδες Α και Β διασυνδέθηκαν, πέραν των δύο δισουλφιδικών δεσμών και με αμιδικό δεσμό μεταξύ των πλευρικών αλυσίδων του Glu(A21) και της Lys(B29) μέσω του τριπεπτιδίου Arg-Arg-Gly, με στόχο τη δημιουργία παραγώγου με αυξημένη ενζυμική σταθερότητα και διάρκεια δράσης. Οι κατάλληλα προστατευμένες Α- και Β- αλυσίδες παρασκευάσθηκαν με step by step σύνθεση επί της 2-χλωροτριτυλο ρητίνης, ακολουθώντας την Fmoc/tBu μεθοδολογία. Στην περίπτωση της Α-αλυσίδας η σύνθεση πραγματοποιήθηκε με προσκόλληση αρχικά της Fmoc-Gly-OH επί της ρητίνης μέσω της α-καρβοξυλομάδας. Η σύνθεση της Β-αλυσίδας πραγματοποιήθηκε με αρχική προσκόλληση της Fmoc-Thr(tBu)-OH και δεύτερη προσκόλληση της Fmoc-Lys(Mmt)-OH. H Mmt ομάδα απομακρύνθηκε εκλεκτικά με 1,5 % TFA, ταυτόχρονα με την διάσπαση της προστατευμένης Β-αλυσίδας από τη ρητίνη. Η διασύνδεση των δύο αλυσίδων πραγματοποιήθηκε σε υγρή φάση με συμπύκνωση (fragment condensation) του Pfp-εστέρα της προστατευμένης Α-αλυσίδας με τη Β-αλυσίδα. Ακολούθησε αποπροστασία και οξείδωση δύο σταδίων του σχηματιζόμενου προϊόντος της συμπύκνωσης, με σκοπό το σχηματισμό των δισουλφιδικών δεσμών, απομόνωση και καθαρισμός του επιθυμητού τελικού προϊόντος. Ο έλεγχος της καθαρότητας των τελικών προϊόντων έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (RP-HPLC) και η ταυτοποίησή τους με φασματομετρία μάζας (ESI-MS).
author2 Μπάρλος, Κλεομένης
author_facet Μπάρλος, Κλεομένης
Ζαπαντιώτη, Ευσταθία
format Thesis
author Ζαπαντιώτη, Ευσταθία
author_sort Ζαπαντιώτη, Ευσταθία
title Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
title_short Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
title_full Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
title_fullStr Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
title_full_unstemmed Τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
title_sort τροποποιημένα παράγωγα ινσουλίνης
publishDate 2018
url http://hdl.handle.net/10889/11440
work_keys_str_mv AT zapantiōtēeustathia tropopoiēmenaparagōgainsoulinēs
AT zapantiōtēeustathia modifiedinsulinderivates
_version_ 1771297163222974464