| Περίληψη: | Στην παρούσα μεταπτυχιακή διπλωματική εργασία, έλαβε μέρος η μελέτη της σύνθεσης του τμήματος 69-157 του παράγοντα νέκρωσης όγκων ΤΝF-a ώστε το πεπτιδικό αυτό τμήμα να χρησιμοποιηθεί για να συνδεθεί με το τμήμα 1-68 του ΤΝF-a με την μέθοδο της Φυσικής Χημικής Σύνδεσης (Native Chemical Ligation), αλλά και της συμπύκνωσης πεπτιδικών τμημάτων σε στερεά και υγρή φάση. Η σύνθεση του τμήματος ΤΝF(69-157) βασίστηκε στον συνδυασμό σταδιακής σύνθεσης και συμπύκνωσης πεπτιδικών τμημάτων σε στερεά φάση, όπως επίσης και συμπύκνωσης ενεργών εστέρων (πενταφθοροφαινυλεστέρας) πεπτιδικών τμημάτων σε διάλυμα. Πιο συγκεκριμένα η πεπτιδική αλυσίδα συντέθηκε αρχικά σε τμήματα σε στερεά φάση και έπειτα αυτά συνδέθηκαν μεταξύ τους με την μέθοδο της συμπύκνωσης πεπτιδικών τμημάτων. Η επιλογή τομής του αναλόγου έγινε έτσι ώστε στο καρβοξυτελικό άκρο των πεπτιδικών τμημάτων να υπάρχει Γλυκίνη ή Προλίνη για να αποφευχθούν προβλήματα ρακεμίωσης. Για τη σύνθεση των πεπτιδίων αυτών πραγματοποιήθηκε σταδιακή σύνθεση των επιμέρους τμημάτων στην 2-χλωροτριτυλοχλωρίδιο ρητίνη, με την Fmoc/tBu μεθοδολογία και έπειτα απομάκρυνση των συντιθέμενων πεπτιδίων από τη ρητίνη με όξινες συνθήκες ώστε αυτά να χρησιμοποιηθούν για να πραγματοποιηθούν οι συμπυκνώσεις. Η σταδιακή σύνθεση αλλά και η συμπύκνωση των τμημάτων εμφάνισε πολλές δυσκολίες λόγω της λιποφιλικότητας των αμινοξέων που συνθέτουν την πεπτιδική αλυσίδα και για τον λόγο αυτό έλαβαν χώρα ποικίλες μέθοδοι σύνθεσης.
Ο έλεγχος της πορείας της σύνθεσης και της καθαρότητας των τελικών προϊόντων έγινε με υγρή χρωματογραφία υψηλής επίδοσης (RP-HPLC) και η ταυτοποίησή τους με φασματομετρία μάζας (ESI-MS).
|
|---|
