Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος
Το κακόηθες υπεζωκοτικό μεσοθηλίωμα (ΚΥΜ) είναι ένα ιδιαίτερα επιθετικό νεόπλασμα, που προσβάλλει περίπου 10.000 άτομα ανά έτος παγκοσμίως. Από τις κύριες αιτιολογίες του όγκου είναι η επίδραση ινών αμιάντου στα μεσοθηλιακά κύτταρα, ενώ συνήθως συνοδεύεται από κακοήθη υπεζωκοτική συλλογή (ΚΥΣ). Το Κ...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2018
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/11492 |
| id |
nemertes-10889-11492 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Κακόηθες υπεζωκοτικό μεσοθηλίωμα Καρκίνος Διαγονιδιακά KRAS TP53 Malignant pleural mesothelioma Cancer Transgenic 571.978 |
| spellingShingle |
Κακόηθες υπεζωκοτικό μεσοθηλίωμα Καρκίνος Διαγονιδιακά KRAS TP53 Malignant pleural mesothelioma Cancer Transgenic 571.978 Κροντηρά, Ανθοδέσμη Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| description |
Το κακόηθες υπεζωκοτικό μεσοθηλίωμα (ΚΥΜ) είναι ένα ιδιαίτερα επιθετικό νεόπλασμα, που προσβάλλει περίπου 10.000 άτομα ανά έτος παγκοσμίως. Από τις κύριες αιτιολογίες του όγκου είναι η επίδραση ινών αμιάντου στα μεσοθηλιακά κύτταρα, ενώ συνήθως συνοδεύεται από κακοήθη υπεζωκοτική συλλογή (ΚΥΣ). Το ΚΥΜ υποδιαιρείται σε τρεις κύριους ιστολογικούς υπότυπους: το επιθηλιακό, το σαρκωματώδες και το διφασικό ή μεικτό, που περιέχει τόσο επιθηλιακές όσο και σαρκωματώδεις περιοχές, με τον σαρκωματώδη τύπο να αποτελεί κακό προγνωστικό παράγοντα για τον ασθενή.
Το μεσοθηλίωμα παρουσιάζει ένα συνδυασμό μεταλλάξεων, συμπεριλαμβανομένων αυτών της απώλειας λειτουργίας ογκοκατασταλτικών γονιδίων όπως τα BAP1, NF2, CDKN2A, και TP53, καθώς και σποραδικών μεταλλάξεων ογκογονιδίων, όπως του KRAS και άλλων μεταλλάξεων της σηματοδοτικής οδού RAS. Μέχρι σήμερα δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία της νόσου και οι ασθενείς παρουσιάζουν κακή ποιότητα ζωής, με μέση επιβίωση 9-12 μήνες.
Όλα αυτά οδηγούν στο συμπέρασμα ότι χρειάζονται επειγόντως κατάλληλα προ-κλινικά μοντέλα ΚΥΜ και νέες θεραπευτικές στρατηγικές. Για το σκοπό αυτό, έχουν δημιουργηθεί καρκινικές κυτταρικές σειρές ΚΥΜ από ανθρώπους και ποντικούς μέσω έκθεσης σε ίνες αμιάντου και ανάπτυξη υπό προϋποθέσεων διαγονιδιακών μοντέλων ποντικού που βασίζονται στη συνδυασμένη αδρανοποίηση των Nf2, Trp53 και Cdkn2A γονιδίων. Αυτά τα μοντέλα είναι απαιτητικά καθώς χρειάζονται ταυτόχρονη ομοζυγωτική ή ετεροζυγωτική αδρανοποίηση 2 ή 3 γονιδίων, έχουν περίοδο επώασης μεγαλύτερη των 6 μηνών και προκαλούν ΚΥΜ χωρίς δημιουργία ΚΥΣ.
Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να αναπτυχθούν νέα μοντέλα ποντικών του όγκου και να προσδιοριστεί η σχέση των μεταλλάξεων του K-ras και της απαλοιφής του Τrp53 με τον τελικό παθολογικό φαινότυπο αυτού. Για να γίνει αυτό, διασταυρώθηκαν υπό προϋποθέσεις διαγονιδιακοί μύες που εκφράζουν το μεταλλαγμένο K-rasG12D (LSL.KRASG12D; K) και διαγραφή του Trp53 γονιδίου (Trp53f/f; Ρ) σε όλους τους πιθανούς συνδυασμούς και εν συνεχεία έγιναν ενδοϋπεζωκοτικές ή ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις αδενοϊού-Cre. Δημιουργήθηκαν κυτταρικές σειρές ΚΥΜ που προήλθαν από τους διπλά διαγονιδιακούς ποντικούς ΚΡ (KrasG12D;Trp53f/f Mεσοθηλιώματα- ΚΡΜ1-3), οι οποίες μεταμοσχεύθηκαν στον υπεζωκότα ποντικών C57BL/6 φυσικού τύπου και δημιούργησαν ΚΥΜ με συσσώρευση ΚΥΣ.
Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η υπεζωκοτικά στοχευμένη K-rasG12D μετάλλαξη όταν συνδυάζεται με εξάλειψη του Trp53 προκαλεί επιθετικό μεσοθηλίωμα σαρκωματώδους τύπου, τόσο στην υπεζωκοτική όσο και στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Ομοίως με την ασθένεια στον άνθρωπο, τα μεσοθηλιώματα των ποντικών εκφράζουν καλρετινίνη, ποδοπλανίνη και οστεοποντίνη, αλλά όχι επιφανειοδραστική πρωτεΐνη C (SFTPC). Οι ΚΡΜ κυτταρικές σειρές υπερεκφράζουν δείκτες ανθρώπινου μεσοθηλιώματος, όπως τους Bapl, Cdkn2a , Msln, Spp1, Efemp1 και Wt1, ενώ το μεταγράφωμα του ανθρώπινου μεσοθηλιώματος ήταν ιδιαίτερα εμπλουτισμένο σε αυτές.
Συμπερασματικά, οι μεσοθηλιακές μεταλλάξεις του K-ras αλληλεπιδρούν με αυτές του Trp53 για να προκαλέσουν την ανάπτυξη μεσοθηλιώματος σε ποντικούς και να διαμορφώσουν την ιστολογία και το φαινότυπο της νόσου. |
| author2 |
Σταθόπουλος, Γεώργιος |
| author_facet |
Σταθόπουλος, Γεώργιος Κροντηρά, Ανθοδέσμη |
| format |
Thesis |
| author |
Κροντηρά, Ανθοδέσμη |
| author_sort |
Κροντηρά, Ανθοδέσμη |
| title |
Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| title_short |
Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| title_full |
Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| title_fullStr |
Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| title_full_unstemmed |
Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| title_sort |
νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος |
| publishDate |
2018 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/11492 |
| work_keys_str_mv |
AT krontēraanthodesmē neogenetikozōïkoprotypokakoēthousmesothēliōmatos AT krontēraanthodesmē newgeneticmousemodelofmalignantmesothelioma |
| _version_ |
1771297142701293568 |
| spelling |
nemertes-10889-114922022-09-05T05:00:05Z Νέο γενετικό ζωϊκό πρότυπο κακοήθους μεσοθηλιώματος New genetic mouse model of malignant mesothelioma Κροντηρά, Ανθοδέσμη Σταθόπουλος, Γεώργιος Σταθόπουλος, Γεώργιος Πέτρου-Παπαδάκη, Ελένη Μπράβου, Βασιλική Krontira, Anthodesmi Κακόηθες υπεζωκοτικό μεσοθηλίωμα Καρκίνος Διαγονιδιακά KRAS TP53 Malignant pleural mesothelioma Cancer Transgenic 571.978 Το κακόηθες υπεζωκοτικό μεσοθηλίωμα (ΚΥΜ) είναι ένα ιδιαίτερα επιθετικό νεόπλασμα, που προσβάλλει περίπου 10.000 άτομα ανά έτος παγκοσμίως. Από τις κύριες αιτιολογίες του όγκου είναι η επίδραση ινών αμιάντου στα μεσοθηλιακά κύτταρα, ενώ συνήθως συνοδεύεται από κακοήθη υπεζωκοτική συλλογή (ΚΥΣ). Το ΚΥΜ υποδιαιρείται σε τρεις κύριους ιστολογικούς υπότυπους: το επιθηλιακό, το σαρκωματώδες και το διφασικό ή μεικτό, που περιέχει τόσο επιθηλιακές όσο και σαρκωματώδεις περιοχές, με τον σαρκωματώδη τύπο να αποτελεί κακό προγνωστικό παράγοντα για τον ασθενή. Το μεσοθηλίωμα παρουσιάζει ένα συνδυασμό μεταλλάξεων, συμπεριλαμβανομένων αυτών της απώλειας λειτουργίας ογκοκατασταλτικών γονιδίων όπως τα BAP1, NF2, CDKN2A, και TP53, καθώς και σποραδικών μεταλλάξεων ογκογονιδίων, όπως του KRAS και άλλων μεταλλάξεων της σηματοδοτικής οδού RAS. Μέχρι σήμερα δεν υπάρχει αποτελεσματική θεραπεία της νόσου και οι ασθενείς παρουσιάζουν κακή ποιότητα ζωής, με μέση επιβίωση 9-12 μήνες. Όλα αυτά οδηγούν στο συμπέρασμα ότι χρειάζονται επειγόντως κατάλληλα προ-κλινικά μοντέλα ΚΥΜ και νέες θεραπευτικές στρατηγικές. Για το σκοπό αυτό, έχουν δημιουργηθεί καρκινικές κυτταρικές σειρές ΚΥΜ από ανθρώπους και ποντικούς μέσω έκθεσης σε ίνες αμιάντου και ανάπτυξη υπό προϋποθέσεων διαγονιδιακών μοντέλων ποντικού που βασίζονται στη συνδυασμένη αδρανοποίηση των Nf2, Trp53 και Cdkn2A γονιδίων. Αυτά τα μοντέλα είναι απαιτητικά καθώς χρειάζονται ταυτόχρονη ομοζυγωτική ή ετεροζυγωτική αδρανοποίηση 2 ή 3 γονιδίων, έχουν περίοδο επώασης μεγαλύτερη των 6 μηνών και προκαλούν ΚΥΜ χωρίς δημιουργία ΚΥΣ. Σκοπός της παρούσας μελέτης ήταν να αναπτυχθούν νέα μοντέλα ποντικών του όγκου και να προσδιοριστεί η σχέση των μεταλλάξεων του K-ras και της απαλοιφής του Τrp53 με τον τελικό παθολογικό φαινότυπο αυτού. Για να γίνει αυτό, διασταυρώθηκαν υπό προϋποθέσεις διαγονιδιακοί μύες που εκφράζουν το μεταλλαγμένο K-rasG12D (LSL.KRASG12D; K) και διαγραφή του Trp53 γονιδίου (Trp53f/f; Ρ) σε όλους τους πιθανούς συνδυασμούς και εν συνεχεία έγιναν ενδοϋπεζωκοτικές ή ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις αδενοϊού-Cre. Δημιουργήθηκαν κυτταρικές σειρές ΚΥΜ που προήλθαν από τους διπλά διαγονιδιακούς ποντικούς ΚΡ (KrasG12D;Trp53f/f Mεσοθηλιώματα- ΚΡΜ1-3), οι οποίες μεταμοσχεύθηκαν στον υπεζωκότα ποντικών C57BL/6 φυσικού τύπου και δημιούργησαν ΚΥΜ με συσσώρευση ΚΥΣ. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η υπεζωκοτικά στοχευμένη K-rasG12D μετάλλαξη όταν συνδυάζεται με εξάλειψη του Trp53 προκαλεί επιθετικό μεσοθηλίωμα σαρκωματώδους τύπου, τόσο στην υπεζωκοτική όσο και στην περιτοναϊκή κοιλότητα. Ομοίως με την ασθένεια στον άνθρωπο, τα μεσοθηλιώματα των ποντικών εκφράζουν καλρετινίνη, ποδοπλανίνη και οστεοποντίνη, αλλά όχι επιφανειοδραστική πρωτεΐνη C (SFTPC). Οι ΚΡΜ κυτταρικές σειρές υπερεκφράζουν δείκτες ανθρώπινου μεσοθηλιώματος, όπως τους Bapl, Cdkn2a , Msln, Spp1, Efemp1 και Wt1, ενώ το μεταγράφωμα του ανθρώπινου μεσοθηλιώματος ήταν ιδιαίτερα εμπλουτισμένο σε αυτές. Συμπερασματικά, οι μεσοθηλιακές μεταλλάξεις του K-ras αλληλεπιδρούν με αυτές του Trp53 για να προκαλέσουν την ανάπτυξη μεσοθηλιώματος σε ποντικούς και να διαμορφώσουν την ιστολογία και το φαινότυπο της νόσου. Malignant Pleural Mesothelioma or MPM is an uncommon but dreadful neoplasm that affects up to 10,000 people per year worldwide. MPM arises from the mesothelial cells lining the pleural cavities that are exposed to asbestos fibers and is commonly accompanied by a malignant pleural effusion (MPE). MPM is subdivided into three major histologic subtypes: the epithelioid, the sarcomatoid and the biphasic, containing both epithelial and sarcomatous areas, with the sarcomatoid type being a predictor of a poor outcome. Mesothelioma harbors a mosaic of mutations, including frequent BAP1, NF2, CDKN2A, and TP53 loss-of-function, as well as sporadic KRAS and other RAS-pathway gain-of-function mutations. Although the severity of its symptoms there is no effective cure for MPM, with the median survival being 9-12 months, even with the contemporary multi modality treatment. There is an urgent need to improve MPM patient outcomes and this requires both appropriate pre-clinical models and new therapeutic strategies. To this end, there have been generated human and mouse MPM cancer cell lines by intrapleural exposure to asbestos fibers and elegant conditional mouse models of MPM that rest on combined inactivation of Nf2, Trp53 and Cdkn2A. But these models are demanding due to the need for homozygocity of 2 or 3 transgenic alleles, display long latency time of more than 6 months and cause dry tumors without MPE, as opposed to the human MPM. So, mouse models for the disease are sparse and mesothelioma-associated effusions have not been recapitulated in mice. The aim of the present study was to investigate the causality of KRAS mutations and TP53 loss and to develop new mouse models for mesothelioma. To accomplish that, we intercrossed conditional mutant Kras-expressing (LSL.KRASG12D; K) and Trp53-deleted (Trp53f/f; P) mice in all possible combinations, followed by intrapleural or intraperitoneal injections of adenovirus-Cre. Efficient and widespread pleural recombination was verified using dual fluorescent Cre-reporter mice. Multiple cell lines were derived from primary MPM from KP mice (KrasG12D;Trp53f/f Mesotheliomas- ΚΡΜ1-3) and transplanted back to C57BL/6 mice. Our results show that pleural mesothelial-targeted K-rasG12D when combined with Trp53 deletion caused aggressive sarcomatoid effusion-associated mesothelioma, both in the pleural and peritoneal cavities. Similar to human disease, mouse mesotheliomas expressed calretinin, podoplanin, and osteopontin, but not surfactant protein C. Murine mesothelioma cell lines carried the causative KRAS/Trp53 lesions, caused effusion-associated mesothelioma in naïve mice, and overexpressed human mesothelioma markers Bap1, Cdkn2a, Msln, Spp1, Efemp1, and Wt1. The transcriptome of human mesothelioma was highly enriched in murine mesothelioma cell lines. In conclusion, mesothelial K-ras mutations cooperate with Trp53 to cause mesothelioma in mice and to shape disease histology and phenotype. 2018-08-01T11:07:59Z 2018-08-01T11:07:59Z 2017-07-13 Thesis http://hdl.handle.net/10889/11492 gr 12 application/pdf |
