Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα
Η Ddx5 ανήκει στην DEAD BOX οικογένεια των RNA ελικασών. Ο ρόλος της στην έναρξη και εξέλιξη του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα δεν έχει διερευνηθεί εκτενώς. Για τον σκοπό αυτό χρησιμοποιήσαμε πληθώρα in vitro και in vivo πειραμάτων. In vitro, εξετάστηκε ο ρυθμός ανάπτυξης σταθερών κλώνων MC38(Αδενο...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2018
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/11493 |
| id |
nemertes-10889-11493 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Αδενοκαρκίνωμα Καρκινογένεση Adenocarcinoma Carcinogenesis 616.994 240 42 |
| spellingShingle |
Αδενοκαρκίνωμα Καρκινογένεση Adenocarcinoma Carcinogenesis 616.994 240 42 Κατή, Δανάη Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| description |
Η Ddx5 ανήκει στην DEAD BOX οικογένεια των RNA ελικασών. Ο ρόλος της στην έναρξη και εξέλιξη του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα δεν έχει διερευνηθεί εκτενώς. Για τον σκοπό αυτό χρησιμοποιήσαμε πληθώρα in vitro και in vivo πειραμάτων. In vitro, εξετάστηκε ο ρυθμός ανάπτυξης σταθερών κλώνων MC38(Αδενοκαρκίνωμα παχέος εντέρου ποντικού) που είχαν διαμολυνθεί με πλασμίδια που εκφράζουν τις πρωτεΐνες Ddx5-GFP και Ddx5 mutant-GFP. Η υπερέκφραση της πρωτεΐνης Ddx5 mutant δρα κατασταλτικά για την λειτουργία της φυσιολογικής. Ο ρυθμός ανάπτυξης των σταθερών κλώνων αξιολογήθηκε με MTT assay και παρατηρήθηκε αυξημένος στον κλώνο που υπερέκφραζε την Ddx5. Σε μια σειρά in vivo πειραμάτων, χορηγήθηκε σε ποντίκια στελέχους FVB το καρκινογόνο του καπνού ουρεθάνη και απομονώθηκαν πνεύμονες ή όγκοι σε διάφορα χρονικά σημεία. Από τα δείγματα αυτά απομονώθηκε πρωτεϊνικό εκχύλισμα και εξετάσθηκαν τα πρότυπα έκφρασης για τρεις πρωτεΐνες(Ddx5, Kras, PCNA) με ανοσοστύπωμα Western. Επιπλέον, σε ποντίκια στελέχους C57BL/6 που επιτρέπουν την ιστοειδική απαλοιφή του γονιδίου της Ddx5 (Ddx5 fl/fl), αποσιωπήθηκε από το πνευμονικό επιθήλιο η Ddx5 από ενδοτραχειακή χορήγηση αδενοϊού που εκφράζει την Cre ρεκομπινάση και ακολούθησε χορήγηση ουρεθάνης. Η επίδραση της παρεμβολής αυτής στην καρκινογένεση του πνεύμονα εξετάστηκε και παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική μείωση στον αριθμό των όγκων που αναπτύχθηκαν στα ποντίκια που δεν εξέφραζαν Ddx5 στο πνευμονικό επιθήλιο. Από τους όγκους που βρέθηκαν, απομονώθηκε DNA για μελέτη μεταλλάξεων και απώλειας του γονιδίου DDX5.
Συνοπτικά, παρατηρήθηκε πως η υπερέκφραση της Ddx5 οδηγεί σε αύξηση του ρυθμού ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων, η οποία σχετίζεται με την δράση ελικάσης. Επιπλέον, σε χημικά-επαγόμενο μοντέλο αδενοκαρκινώματος, η Ddx5 εμφανίζεται αυξημένη τόσο στα αρχικά στάδια της καρκινογένεσης όσο και στους ήδη σχηματισμένους όγκους. Η αποσιώπηση της πρωτεΐνης από το πνευμονικό επιθήλιο οδηγεί σε κάποιες περιπτώσεις στην μη δημιουργία αδενοκαρκινώματος και την καθυστέρηση της βλάβης στο στάδιο της φλεγμονής. |
| author2 |
Σταθόπουλος, Γεώργιος |
| author_facet |
Σταθόπουλος, Γεώργιος Κατή, Δανάη |
| format |
Thesis |
| author |
Κατή, Δανάη |
| author_sort |
Κατή, Δανάη |
| title |
Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_short |
Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_full |
Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_fullStr |
Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_full_unstemmed |
Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_sort |
ο ρόλος της ελικάσης ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| publishDate |
2018 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/11493 |
| work_keys_str_mv |
AT katēdanaē orolostēselikasēsddx5stoadenokarkinōmatoupneumona AT katēdanaē theroleofhelicaseddx5inlungadenocarcinoma |
| _version_ |
1771297173703491584 |
| spelling |
nemertes-10889-114932022-09-05T06:58:02Z Ο ρόλος της ελικάσης Ddx5 στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα The role of helicase Ddx5 in lung adenocarcinoma Κατή, Δανάη Σταθόπουλος, Γεώργιος Λυγερού, Ζωή Μπράβου, Βασιλική Σταθόπουλος, Γεώργιος Kati, Danai Αδενοκαρκίνωμα Καρκινογένεση Adenocarcinoma Carcinogenesis 616.994 240 42 Η Ddx5 ανήκει στην DEAD BOX οικογένεια των RNA ελικασών. Ο ρόλος της στην έναρξη και εξέλιξη του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα δεν έχει διερευνηθεί εκτενώς. Για τον σκοπό αυτό χρησιμοποιήσαμε πληθώρα in vitro και in vivo πειραμάτων. In vitro, εξετάστηκε ο ρυθμός ανάπτυξης σταθερών κλώνων MC38(Αδενοκαρκίνωμα παχέος εντέρου ποντικού) που είχαν διαμολυνθεί με πλασμίδια που εκφράζουν τις πρωτεΐνες Ddx5-GFP και Ddx5 mutant-GFP. Η υπερέκφραση της πρωτεΐνης Ddx5 mutant δρα κατασταλτικά για την λειτουργία της φυσιολογικής. Ο ρυθμός ανάπτυξης των σταθερών κλώνων αξιολογήθηκε με MTT assay και παρατηρήθηκε αυξημένος στον κλώνο που υπερέκφραζε την Ddx5. Σε μια σειρά in vivo πειραμάτων, χορηγήθηκε σε ποντίκια στελέχους FVB το καρκινογόνο του καπνού ουρεθάνη και απομονώθηκαν πνεύμονες ή όγκοι σε διάφορα χρονικά σημεία. Από τα δείγματα αυτά απομονώθηκε πρωτεϊνικό εκχύλισμα και εξετάσθηκαν τα πρότυπα έκφρασης για τρεις πρωτεΐνες(Ddx5, Kras, PCNA) με ανοσοστύπωμα Western. Επιπλέον, σε ποντίκια στελέχους C57BL/6 που επιτρέπουν την ιστοειδική απαλοιφή του γονιδίου της Ddx5 (Ddx5 fl/fl), αποσιωπήθηκε από το πνευμονικό επιθήλιο η Ddx5 από ενδοτραχειακή χορήγηση αδενοϊού που εκφράζει την Cre ρεκομπινάση και ακολούθησε χορήγηση ουρεθάνης. Η επίδραση της παρεμβολής αυτής στην καρκινογένεση του πνεύμονα εξετάστηκε και παρατηρήθηκε στατιστικά σημαντική μείωση στον αριθμό των όγκων που αναπτύχθηκαν στα ποντίκια που δεν εξέφραζαν Ddx5 στο πνευμονικό επιθήλιο. Από τους όγκους που βρέθηκαν, απομονώθηκε DNA για μελέτη μεταλλάξεων και απώλειας του γονιδίου DDX5. Συνοπτικά, παρατηρήθηκε πως η υπερέκφραση της Ddx5 οδηγεί σε αύξηση του ρυθμού ανάπτυξης των καρκινικών κυττάρων, η οποία σχετίζεται με την δράση ελικάσης. Επιπλέον, σε χημικά-επαγόμενο μοντέλο αδενοκαρκινώματος, η Ddx5 εμφανίζεται αυξημένη τόσο στα αρχικά στάδια της καρκινογένεσης όσο και στους ήδη σχηματισμένους όγκους. Η αποσιώπηση της πρωτεΐνης από το πνευμονικό επιθήλιο οδηγεί σε κάποιες περιπτώσεις στην μη δημιουργία αδενοκαρκινώματος και την καθυστέρηση της βλάβης στο στάδιο της φλεγμονής. Ddx5 is a DEAD BOX RNA helicase that interests us in its role in the formation and progression of lung adenocarcinoma. To investigate that role, we used various in vitro and in vivo models. In vitro, we tested the phenotypic changes of MC38(Murine colon) cancer cell line after its permanent transfection with plasmids that express the Ddx5-GFP and Ddx5 mutant-GFP. The overexpression of Ddx5 mutant leads to Ddx5 loss of function. The proliferation rate of the cells was tested in vitro (MTT assay) and we observed a statistically significant increase in the proliferation rate of the MC38 clone that was overexpressing the normal Ddx5. In vivo, we isolated lungs and/or tumors from FVB mice, after injecting them with the tobacco-contained carcinogen urethane, in different time points and we examined the expression levels of Ddx5, Kras and PCNA with Western blot analysis. We noticed an immediate overexpression of Ddx5 after the injection with the carcinogen, and overexpression of the protein in all the tumors that were formed. Furthermore, after conditional inactivation of the protein in Ddx5 fl/fl mice by endotracheal injection with adenovirus expressing CRE recombinase and subsequent exposure of these mice to urethane, we evaluated the tumorigenesis in the lungs after approximately six months. We observed a statistically significant drop in tumor number in the lung epithelium that Ddx5 was not expressed. DNA was extracted from the tumors to evaluate gene mutations and DDX5 loss with PCR. In conclusion, we proved that the Ddx5 overexpression leads to an induction in growth rate, that is related to the RNA helicase activity of the protein. In addition, in a chemically induced murine cancer model, we observed that the Ddx5 overexpression is an early event in lung carcinogenesis and Ddx5 is also overexpressed in the mice lung tumors. That overexpression is not consistent with the overexpression of Kras protein. When the protein is deleted from the lung epithelium, the number of tumors is statistically significant dropped, and in some cases we don’t observe carcinogenesis but arrest in the previews stages(inflammation). 2018-08-01T11:09:00Z 2018-08-01T11:09:00Z 2017-07-13 Thesis http://hdl.handle.net/10889/11493 gr 12 application/pdf |
