| Περίληψη: | Οι εφαρμογές της φωτογράφισης ως μέσο ανίχνευσης σε μοριακές μελέτες αναπτύσσονται και βελτιστοποιούνται ταχέως τα τελευταία χρόνια με την πλέον θεμελιωμένη χρήση CCD κάμερας, όπως στις μικροσυστοιχίες DNA και άλλες μεθόδους, ενώ έχει αναφερθεί ακόμα και ανίχνευση μονονουκλεοτιδικών πολυμορφισμών (SNPs) με κάμερα από smartphone.
Στην παρούσα μελέτη γίνεται ανίχνευση χημειοφωταυγών αντιδράσεων με τη χρήση ψηφιακής SLR κάμερας και βελτιστοποιήσεις τόσο στις συνθήκες της φωτογράφισης όσο και στην ανάλυση των λαμβανόμενων φωτογραφιών. Οι φωτογραφίες αναλύονται και ποσοτικοποιούνται μέσω του ειδικού λογισμικού Image J, ενός πρόσφατα αναπτυγμένου από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας των ΗΠΑ πρόγραμμα με ποικίλες εφαρμογές στην επεξεργασία εικόνων που αφορούν και αναλύσεις στον τομέα της υγείας.
Ως αναλύτες επιλέχθηκαν η αλκαλική φωσφατάση (ALP) σε δείγματα γάλακτος, καθώς και ένα τμήμα του cDNA του γονιδίου του HPRT1 (φωσφοριβοσυλοτρανφεράση της υποξανθίνης) και του εσωτερικού του προτύπου (Internal Standard, IS).
Η ALP έχει εγκριθεί από πολλές χώρες ως πρότυπη δοκιμασία για ταχεία επικύρωση της διαδικασίας παστερίωσης του γάλακτος λόγω της μεγαλύτερης ανθεκτικότητάς της στη θερμική επεξεργασία από ότι τα παθογόνα βακτήρια, οπότε η αδρανοποίηση της ίδιας συνεπάγεται θανάτωση και των παθογόνων βακτηρίων.
Η αλληλουχία του γονιδίου του HPRT1 επιλέχθηκε ως αναλύτης σε μια σύνθετη διαδικασία αντιδράσεων, μέσω μεθόδων υβριδοποίησης, που περιλαμβάνουν την ακινητοποίηση και χημειοφωταυγειομετρική ανίχνευση δίκλωνων αλληλουχιών DNA με φωτογραφική μηχανή.
Στην παρούσα διπλωματική εργασία περιγράφονται οι μελέτες των συνθηκών της λήψης και επεξεργασίας του σήματος, αλλά και των πειραματικών διαδικασιών κλείνοντας το κάθε πειραματικό μέρος με καμπύλες βαθμονόμησης για το κάθε μόριο- αναλύτη.
|
|---|
