| Περίληψη: | Η πρωτεόλυση μέσω του συστήματος ουβικιτίνης-πρωτεασώματος αποτελεί ένα σημαντικό μέσο κυτταρικού ελέγχου. Η διαδικασία, γνωστή ως ουβικιτινίωση, συνιστά μια μετα-μεταφραστική διαδικασία, μέσω της οποίας ρυθμίζεται η ομοιόσταση των κυττάρων και κατά συνέπεια του οργανισμού. Συντελείται με τη συνέργεια τριών ενζύμων, των Ε1, Ε2 και Ε3. Τα ένζυμα Ε3, οι λιγάσες ουβικιτίνης, θεωρούνται υπεύθυνα για την εκλεκτικότητα της διαδικασίας. Η πρωτεΐνη Arkadia 2 αποτελεί μια Ε3 λιγάση ουβικιτίνης, η οποία στοχεύει προς αποικοδόμηση ορισμένους αρνητικούς ρυθμιστές του σηματοδοτικού μονοπατιού Μορφογενετικών Πρωτεϊνών των Οστών (ΒΜΡ), μέσω του C’-τελικού της RING τομέα. Με αυτό τον τρόπο, ενισχύει τη σηματοδότηση του μονοπατιού ΒΜΡ. Ο τομέας RING (Really Interesting New Gene) είναι ένας μικρός τομέας ο οποίος προσδένει δύο ιόντα ψευδαργύρου με έναν χαρακτηριστικό τρόπο, μέσω συντηρημένων καταλοίπων Cys και His. Είναι υπεύθυνος για τη δράση της πρωτεΐνης ως Ε3 λιγάση, ενώ η ένταξη των δύο ιόντων ψευδαργύρου απαιτείται για τη σωστή αναδίπλωση και λειτουργία του μορίου. Η Arkadia 2 ονομάζεται και RING finger 165. Στην παρούσα εργασία μελετήθηκαν δύο μεταλλάγματα του C’-τελικού τμήματος της πρωτεΐνης, το οποίο αποτελείται από 68 αμινοξέα και περιέχει τον RING τομέα. Τα δύο μεταλλάγματα που σχεδιάστηκαν, αφορούσαν την αντικατάσταση της Trp324 της πρωτεΐνης από Ala και Arg (WtoA και WtoR αντίστοιχα). Πραγματοποιήθηκε η επίλυση των δομών των μεταλλαγμάτων μέσω φασματοσκοπίας NMR. Η δομή της Arkadia 2 WtoA προσδιορίστηκε με την ανάλυση φασμάτων NMR καταλήγοντας σε μια οικογένεια 30 δομών με Target Function 0.87+/-0.0872 Å, και RMSD 0.52+/-0.14 Å, ενώ η δομή της Arkadia 2 WtoR με αντίστοιχες τιμές Target Function 0.85+/-0.12 Å και RMSD 0.77+/-0.32 Å. Επίσης, πραγματοποιήθηκαν μελέτες κινητικότητας των δύο μεταλλαγμάτων, όπως και μελέτες αλληλεπίδρασης με το ένζυμο Ε2 UbcH5b, απαραίτητο για τη δράση των μορίων ως Ε3 λιγάσες.
|
|---|
