Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα
Ο καρκίνος του πνεύμονα, αποτελεί τη συχνότερη αιτία θνητότητας από καρκίνο παγκοσμίως ενώ πλήθος μελετών συνδέουν την εμφάνιση του με το κάπνισμα. Διακρίνεται σε δύο κύριους τύπους, το μικροκυτταρικό (SCLC) και το μη μικροκυτταρικό (NSCLC). Tο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα αποτελεί μία από τις συχνότ...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2019
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/11906 |
| id |
nemertes-10889-11906 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Καρκίνος του πνεύμονα Αδενοκαρκίνωμα Lung cancer Trp53 616.994 240 7 |
| spellingShingle |
Καρκίνος του πνεύμονα Αδενοκαρκίνωμα Lung cancer Trp53 616.994 240 7 Oπλοποιού, Μαρία Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| description |
Ο καρκίνος του πνεύμονα, αποτελεί τη συχνότερη αιτία θνητότητας από καρκίνο παγκοσμίως ενώ πλήθος μελετών συνδέουν την εμφάνιση του με το κάπνισμα. Διακρίνεται σε δύο κύριους τύπους, το μικροκυτταρικό (SCLC) και το μη μικροκυτταρικό (NSCLC). Tο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα αποτελεί μία από τις συχνότερες παθήσεις του πνεύμονα παγκοσμίως και επομένως σημαντικό πρόβλημα στον τομέα της δημόσιας υγείας, αφού αποτελεί το 50% του μη-μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα και το 40% του όγκων που ανιχνεύονται σε καρκίνο του πνεύμονα συνολικά.
Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι ο χαρακτηρισμός των Trp53 μεταλλάξεων σε όγκους που έχουν προκληθεί από χημικά επαγώμενη καρκινογένεση και ο προσδιορισμός λειτουργίας τους.
Η ενεργοποίηση του ογκογονιδίου KRAS συνοδευόμενη από την απενεργοποίηση του ογκοκατασταλτικού γονιδίου TP53 αποτελούν σημαντικούς παράγοντες στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα στον άνθρωπο και αντίστοιχα εντοπίζονται σε όγκους του πνεύμονα που επάγονται από την ουρεθάνη στα ποντίκια[1].Παρόλα αυτά, λίγα είναι γνωστά για το χρονικό και τη λειτουργία των TP53 μεταλλάξεων. Στην παρούσα εργασία, κύριος σκοπός ήταν η επαγωγή των Trp53 μεταλλάξεων στους ποντικούς από χημικά καρκινογόνα του καπνού και η αναγνώριση της λειτουργίας τους. Επίσης, Trp53f/f ποντικοί διασταυρώθηκαν με Lyz2.Cre, Sftpc.Cre και Scgb1a1.Cre FVB ποντικούς αντίστοιχα, και οι απόγονοι έλαβαν μονή δόση ουρεθάνης και οι όγκοι εξετάστηκαν μετά από έξι μήνες. Επιπλέον, καρκινικές κυτταρικές σειρές παρουσία ή ελλείψει του Trp53 ελέγχθηκαν για τυχόν μπορφολογικές διαφορές τους κατά την κυττατική διαίρεση καθώς και όσον αφορά το φαινόμενο της EMT και της μετάστασης. Τελικός σκοπός να διευκρινισθεί ο ρόλος του παραπάνω γονιδίου όσον αφορά τις ανωτέρω διαδικασίες.
To 62.5% των ποντικών FvB, 44.7% των ποντικών BALB/c και 0% των όγκων των ποντικών C57BL/6 ανιχνεύθηκαν με ετεροζυγωτική ή ομοζυγωτική απώλεια του Trp53. Ποντικοί με γονότυπο Trp53f/wt;Lyz2.Cre και Trp53f/f;Sftpc.Cre εμφανίζουν αυξημένο αριθμό και διάμετρο αντίστοιχα των όγκων που επάγονται από ουρεθάνη, συγκριτικά με τα υπόλοιπα μοντέλα ποντικών (ANOVA P=0.001). Κλείνοντας, παρατηρήθηκε ότι στα καρκινικά κύτταρα Trp53f/f+pCAG.Luc (CULA) με έλλειψη Trp53 εμφάνισαν ανωμαλίες στη μιτωτική άτρακτο και στη μορφολογία του πυρήνα τους αλλά και σημαντικά στατιστική διαφορά στη μέθοδο επούλωσης in vitro και υποδόρια έγχυση των κυττάρων σε C57BL/6 μύες in vivo.
Συμπερασματικά, η απώλεια του Trp53 προάγει όχι μόνο την εγκαθίδρυση, αλλά και την αύξηση του όγκου. Ο ρόλος του Trp53 κατά την ογκογένεση φαίνεται να περιορίζεται στα κυψελιδικά κύτταρα τύπου ΙΙ που εκφράζουν τη Lyz2 και την επιφανειοδραστική πρωτεΐνη C (Sftpc) και εμφανίζουν αναγεννητικές ιδιότητες. Eπιπλέον, η έλλειψη του γονιδίου φαίνεται ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην κυτταρική μετανάστευση ή τη μετάσταση. |
| author2 |
Σταθόπουλος, Γεώργιος |
| author_facet |
Σταθόπουλος, Γεώργιος Oπλοποιού, Μαρία |
| format |
Thesis |
| author |
Oπλοποιού, Μαρία |
| author_sort |
Oπλοποιού, Μαρία |
| title |
Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_short |
Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_full |
Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_fullStr |
Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_full_unstemmed |
Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| title_sort |
ο ρόλος του trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα |
| publishDate |
2019 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/11906 |
| work_keys_str_mv |
AT oplopoioumaria orolostoutrp53stochēmikaepagōmenoadenokarkinōmatoupneumona AT oplopoioumaria trp53signalinginchemicallyinducedlungadenocarcinoma |
| _version_ |
1771297267330842624 |
| spelling |
nemertes-10889-119062022-09-05T13:58:18Z Ο ρόλος του Trp53 στο χημικά επαγώμενο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα Trp53 signaling in chemically induced lung adenocarcinoma Oπλοποιού, Μαρία Σταθόπουλος, Γεώργιος Μπράβου, Βασιλική Πατρινός, Γεώργιος Oplopoiou, Maria Καρκίνος του πνεύμονα Αδενοκαρκίνωμα Lung cancer Trp53 616.994 240 7 Ο καρκίνος του πνεύμονα, αποτελεί τη συχνότερη αιτία θνητότητας από καρκίνο παγκοσμίως ενώ πλήθος μελετών συνδέουν την εμφάνιση του με το κάπνισμα. Διακρίνεται σε δύο κύριους τύπους, το μικροκυτταρικό (SCLC) και το μη μικροκυτταρικό (NSCLC). Tο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα αποτελεί μία από τις συχνότερες παθήσεις του πνεύμονα παγκοσμίως και επομένως σημαντικό πρόβλημα στον τομέα της δημόσιας υγείας, αφού αποτελεί το 50% του μη-μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα και το 40% του όγκων που ανιχνεύονται σε καρκίνο του πνεύμονα συνολικά. Σκοπός της παρούσας εργασίας είναι ο χαρακτηρισμός των Trp53 μεταλλάξεων σε όγκους που έχουν προκληθεί από χημικά επαγώμενη καρκινογένεση και ο προσδιορισμός λειτουργίας τους. Η ενεργοποίηση του ογκογονιδίου KRAS συνοδευόμενη από την απενεργοποίηση του ογκοκατασταλτικού γονιδίου TP53 αποτελούν σημαντικούς παράγοντες στο αδενοκαρκίνωμα του πνεύμονα στον άνθρωπο και αντίστοιχα εντοπίζονται σε όγκους του πνεύμονα που επάγονται από την ουρεθάνη στα ποντίκια[1].Παρόλα αυτά, λίγα είναι γνωστά για το χρονικό και τη λειτουργία των TP53 μεταλλάξεων. Στην παρούσα εργασία, κύριος σκοπός ήταν η επαγωγή των Trp53 μεταλλάξεων στους ποντικούς από χημικά καρκινογόνα του καπνού και η αναγνώριση της λειτουργίας τους. Επίσης, Trp53f/f ποντικοί διασταυρώθηκαν με Lyz2.Cre, Sftpc.Cre και Scgb1a1.Cre FVB ποντικούς αντίστοιχα, και οι απόγονοι έλαβαν μονή δόση ουρεθάνης και οι όγκοι εξετάστηκαν μετά από έξι μήνες. Επιπλέον, καρκινικές κυτταρικές σειρές παρουσία ή ελλείψει του Trp53 ελέγχθηκαν για τυχόν μπορφολογικές διαφορές τους κατά την κυττατική διαίρεση καθώς και όσον αφορά το φαινόμενο της EMT και της μετάστασης. Τελικός σκοπός να διευκρινισθεί ο ρόλος του παραπάνω γονιδίου όσον αφορά τις ανωτέρω διαδικασίες. To 62.5% των ποντικών FvB, 44.7% των ποντικών BALB/c και 0% των όγκων των ποντικών C57BL/6 ανιχνεύθηκαν με ετεροζυγωτική ή ομοζυγωτική απώλεια του Trp53. Ποντικοί με γονότυπο Trp53f/wt;Lyz2.Cre και Trp53f/f;Sftpc.Cre εμφανίζουν αυξημένο αριθμό και διάμετρο αντίστοιχα των όγκων που επάγονται από ουρεθάνη, συγκριτικά με τα υπόλοιπα μοντέλα ποντικών (ANOVA P=0.001). Κλείνοντας, παρατηρήθηκε ότι στα καρκινικά κύτταρα Trp53f/f+pCAG.Luc (CULA) με έλλειψη Trp53 εμφάνισαν ανωμαλίες στη μιτωτική άτρακτο και στη μορφολογία του πυρήνα τους αλλά και σημαντικά στατιστική διαφορά στη μέθοδο επούλωσης in vitro και υποδόρια έγχυση των κυττάρων σε C57BL/6 μύες in vivo. Συμπερασματικά, η απώλεια του Trp53 προάγει όχι μόνο την εγκαθίδρυση, αλλά και την αύξηση του όγκου. Ο ρόλος του Trp53 κατά την ογκογένεση φαίνεται να περιορίζεται στα κυψελιδικά κύτταρα τύπου ΙΙ που εκφράζουν τη Lyz2 και την επιφανειοδραστική πρωτεΐνη C (Sftpc) και εμφανίζουν αναγεννητικές ιδιότητες. Eπιπλέον, η έλλειψη του γονιδίου φαίνεται ότι παίζει σημαντικό ρόλο στην κυτταρική μετανάστευση ή τη μετάσταση. Lung adenocarcinoma is the number one cancer killer in the world and a public health burden, accounting for almost 50% of non-small-cell lung cancers and 40% of lung tumors overall. Activating mutations in the KRAS oncogene together with inactivating mutations in the tumor suppressor TP53 are key drivers of lung adenocarcinoma and are also present in urethane-induced lung tumors of mice[1]. However, little is known about the timing and the function of TP53 mutations. To characterize the induction of Trp53 mutations in mice by chemical constituents of tobacco smoke and to identify their function. Mice received repetitive intraperitoneal urethane and were examined after six months for lung tumors. Multiple cell lines were isolated from lung tumors and were analyzed for Trp53 loss. Trp53f/f mice received intratracheal adenovirus encoding Cre recombinase two weeks before or after urethane treatment, and tumors were examined after six months. Trp53f/wt και Trp53f/f mice were intercrossed with Lyz2.Cre, Sftpc.Cre and Scgb1a1.CreFVB mice and double heterozygote offspring was treated with urethane. 35,7% of urethane-induced tumors and six of nine cell lines examined featured heterozygous or homozygous Trp53 loss. In addition to primary tumors, cell lines derived thereof featured marked heterogeneity inTrp53loss patterns, even within the same lung. Adenovirus-mediated Trp53 deletion had no effect on subcutaneous lung adenocarcinoma growth nor on de novo urethane-induced tumorigenesis, regardless of the timing of Trp53 deletion. However, specifically Trp53f/wt;Lyz2.Cre and Trp53f/f;Sftpc.Cre mice had increased numbers and diameters of lung tumors induced by urethane respectively, compared with all other lineage-restricted Trp53-deleted mice. Additional, a cancer cell line with Trp53 loss and one without were identified for possible abnormalities at their mitotic spindle and therefore the role of that gene at cell division and woundhealing assay and SC injection were followed to check EMT phenomenon and metastasis. Trp53 loss is caused by the tobacco carcinogen urethane at the tumor initiation-early promotion phase, and functions to promote not only tumor establishment, but also growth. Trp53 tumor promoting functions are restricted to Lyz2 and Sftpc expressing alveolar type II cells with stemness potential.Trp53 loss also plays important role at cell invasion and metastasis. 2019-02-01T18:47:51Z 2019-02-01T18:47:51Z 2018-07-13 Thesis http://hdl.handle.net/10889/11906 gr 6 application/pdf |
