Ταυτοποίηση γονιδίων κυτταροκινών των Τ-βοηθητικών κυττάρων που ελέγχονται από το μεταγραφικό παράγοντα Εts-2

• Κύριος συγγραφέας: Μπεκιάρη, Αλεξάνδρα Ειρήνη
• Άλλοι συγγραφείς: Μουζάκη, Αθανασία
• Μορφή: Thesis
• Γλώσσα: Greek
• Έκδοση: 2019
• Θέματα: T-βοηθητικά κύτταρα; Ets-2 μεταγραφικός παράγοντας; Γονιδιακή έκφραση κυτταροκινών; Th cells; Ets-2 transcription factor; Cytokines gene expression; 616.079

Τα παρθενικά T-βοηθητικά CD4+ (Th) κύτταρα αποτελούν έναν υποπληθυσμό των κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που διαδραματίζουν ζωτικής σημασίας ρόλο στις επίκτητες ανοσοαποκρίσεις. Τα Th κύτταρα μετατρέπονται σε λειτουργικά έπειτα από ενεργοποίηση τους μέσω μιας διαδικασίας που περιλαμβάνει δύο σήματα. Το πρώτο σήμα αφορά στην αναγνώριση και κατόπιν στην πρόσδεση του συμπλόκου πεπτίδιο:MHC II που βρίσκεται στην επιφάνεια των αντιγονοπαρουσιαστικών κυττάρων με το σύμπλοκο του υποδοχέα TCR:CD3. Το δεύτερο σήμα ενέχει την αλληλεπίδραση ανάμεσα στο CD28 μόριο της επιφάνειας των Th κύτταρων με τα μόρια CD80 ή CD86 της επιφάνειας των αντιγονοπαρουσιαστικών κυττάρων. Αφότου ενεργοποιηθούν, παράγεται IL-2, μία κυτταροκίνη αναγκαία για τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση τους σε pre-Th0 κύτταρα. Η έκφραση της IL-2 ρυθμίζεται αυστηρά μέσω της πρόσδεσης μεταγραφικών παραγόντων στον υποκινητή του γονιδίου της. Προηγούμενη ερευνητική δουλειά του εργαστηρίου ανέδειξε το ρόλο του παράγοντα Ets-2 ως καταστολέα στα παρθενικά Τh πριν την ενεργοποίηση και μετάβαση τους στο στάδιο pre-Th0, μέσω της πρόσδεσης του στην ARRE-2 περιοχή του υποκινητή. Με σκοπό να διερευνήσουμε εάν ο μεταγραφικός παράγοντας Ets-2 επηρεάζει την έκφραση των κυτταροκινών IL-2, IL-4, IL-10, IL-17 σε παρθενικά και ενεργοποιημένα Τh κύτταρα σε mRNA επίπεδο, πραγματοποιήθηκε η μέθοδος ημιποσοτικής PCR σε κύτταρα της καρκινικής σειράς Jurkat και σε απομονωμένα μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίμaτος (PBMCs) από υγιείς δότες. Επιπρόσθετα, πραγματοποιήθηκαν οι τεχνικές ανοσοφθορισμού και FISH στα κύτταρα Jurkat ώστε να μελετηθεί η έκφραση του παράγοντα Ets-2 σε πρωτεϊνικό επίπεδο, καθώς και η ρύθμιση των εν λόγω κυτταροκινών μέσω του παράγοντα Ets-2 αντίστοιχα. Σε αυτή την εργασία, παρουσιάζεται η μειωμένη έκφραση του παράγοντα Ets-2 στα ενεργοποιημένα Τh κύτταρα, Jurkat και PBMCs εν αντιθέσει με τα παρθενικά Τh κύτταρα. Ταυτόχρονα, η σημασμένη με φθοριόχρωμα Ets-2 πρωτεΐνη εμφανίζει μείωση στα ενεργοποιημένα κύτταρα Jurkat σε σχέση με τα παρθενικά εν ηρεμία (naive). Από την άλλη πλευρά, η IL-4 παρουσιάζει μείωση στα ενεργοποιημένα Jurkat κύτταρα, ενώ αντίθετα αύξηση στα ενεργοποιημένα PBMCs συγκριτικά με τα μη-ενεργοποιημένα. Οι ιντερελευκίνες IL-10 και IL-17 δεν παράγονται ούτε στα εν ηρεμία (naive) ούτε στα ενεργοποιημένα κύτταρα Jurkat. Συγχρόνως, η έκφραση αυτών σε ένα μεμονωμένο δείγμα υγιούς δότη δεν υποδεικνύει κάποιο βιολογικό αποτέλεσμα. Συμπερασματικά, αξίζει να σημειωθεί ότι ο μεταγραφικός παράγοντας Ets-2 παρουσιάζει διαφορική έκφραση ανάμεσα στα εν ηρεμία και τα ενεργοποιημένα Th κύτταρα τόσο σε επίπεδο mRNA όσο και σε πρωτεϊνικό επίπεδο και σχετίζεται με την έκφραση των κυτταροκινών IL-2 και IL-4. Eπιπλέον πειραματικά δεδομένα απαιτούνται ώστε να διελευκανθεί ο ρόλος του Ets-2 ως ρυθμιστή της έκφρασης των κυτταροκινών που ελέγχθησαν στην παρούσα μελέτη.