| Περίληψη: | Οι μεταλλάξεις της KRAS4B μικρής GTPάσης εμφανίζονται σε μια πληθώρα τύπων καρκίνου και οδηγούν σε μια συνεχώς ενεργό πρωτεΐνη που επηρεάζει πολυάριθμα σηματοδοτικά μονοπάτια, με βασικότερα το σηματοδοτικό καταρράκτη MAP κινασών (MAPK) και το PI3K/AKT/mTOR μονοπάτι. Αυτά καταλήγουν, εκτός άλλων, στη ρύθμιση της έναρξης της πρωτεϊνοσύνθεσης μέσω ενεργοποιητικών και ανασταλτικών φωσφορυλιώσεων συγκεκριμένων παραγόντων έναρξης της μετάφρασης (eIFs), με αποτέλεσμα να επηρεάζεται τόσο ο ρυθμός όσο και το σύνολο των mRNAs που μεταφράζονται. Παράλληλα, μέσω των μονοπατιών αυτών, στρατολογείται ο μεταγραφικός παράγοντας c-MYC, ο οποίος ελέγχει τη μεταγραφή και από τις τρεις RNA πολυμεράσες, με αποτέλεσμα να επηρεάζει με τη σειρά του την πρωτεϊνοσύνθεση, μέσω ρύθμισης της βιογένεσης των ριβοσωμάτων, του σχηματισμού του eIF4F συμπλόκου και της μεταγραφής μορίων tRNA.
Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε σε μοριακό επίπεδο η επίδραση της μετάλλαξης KRAS G12C στη ρύθμιση της έναρξης της πρωτεϊνοσύνθεσης σε δύο κυτταρικές σειρές αδε-νοκαρκινώματος πνεύμονα. Έγινε μεταλλαξιγένεση προς mKras2b G12C από mKras2b WT γονίδιο εισάγοντας με PCR σημειακή μετάλλαξη στο γονίδιο, το οποίο στη συνέχεια εντέθηκε στον πλασμιδιακό φορέα pEGFP-C1. Πραγματοποιήθηκε διαμόλυνση των ανθρώπινων κυτταρικών σειρών A549 και CL1-5 και στη συνέχεια έγινε απομόνωση ολικών πρωτεϊνικών εκχυλισμάτων. Με τη μέθοδο ανοσοαποτύπωσης κατά Western μελετήθηκε η έκφραση και το ποσοστό φωσφορυλίωσης σημαντικών μορίων που συμμετέχουν στα σηματοδοτικά μονοπάτια RAF/MEK/ERK και PI3K/AKT/mTOR, καθώς και στην έναρξη της πρωτεϊνοσύνθεσης. Παρατηρήθηκε ενεργοποίηση των δύο σηματοδοτικών μονοπατιών στις δύο κυτταρικές σειρές, με σημαντικές διαφοροποιήσεις όσον αφορά τα σύμπλοκα mTORC1 και mTORC2. Διακριτός ήταν και ο τρόπος με τον οποίο επηρεάζεται ο σχηματισμός του 43S προεναρκτηρίου συμπλόκου και του eIF4F συμπλόκου έναρξης της εξαρτώμενης από καλύπτρα πρωτεϊνοσύνθεσης στις δύο κυτταρικές σειρές. Φαίνεται, λοιπόν, πως η ρύθμιση της έναρξης της πρωτεϊνοσύνθεσης διαδραματίζεται μέσω εναλλακτικών μηχανισμών στην κάθε κυτταρική σειρά, γεγονός που πιθανώς να οφείλεται στην εμπλοκή διακριτών μεταγραφικών ή/και άλλων παραγόντων στην κάθε περίπτωση.
|
|---|
