| Περίληψη: | Τα τελευταία χρόνια έχει παρατηρηθεί ολοένα και αυξανόμενη ζήτηση στην κατασκευή απλών διατάξεων–βιοαισθητήρων για την γρήγορη, ευαίσθητη και αξιόπιστη ανίχνευση βιομορίων. Μια κατηγορία βιοαισθητήρων είναι οι βιοαισθητήρες τύπου ταινίας ξηρών αντιδραστηρίων, που χρησιμοποιούνται στις δοκιμασίες πλευρικής ροής. Οι βιοαισθητήρες αυτοί χαρακτηρίζονται συνήθως από απλότητα, χαμηλό κόστος, χαμηλό όριο ανίχνευσης και γρήγορη ανάλυση. Διάφοροι βιοαισθητήρες τέτοιου τύπου έχουν αναπτυχθεί κυρίως για την ανίχνευση πρωτεϊνών, αλλά και νουκλεϊκών οξέων, βασιζόμενοι σε διάφορους ιχνηθέτες, όπως νανοσωματίδια χρυσού, έγχρωμα νανοσφαιρίδια, κβαντικές τελείες, φθορίζουσες χρωστικές κα.
Στην παρούσα διπλωματική εργασία μελετήθηκε, σε πρώτο στάδιο, η διαχείριση των συγκριτικά οικονομικότερων φθοριζουσών χρωστικών ουσιών, και συγκεκριμένα της ισοθειοκυανικής φλουορεσκεΐνης (FITC) και της φυκοερυθρίνης (PE), ως ιχνηθέτες βιοαισθητήρων τύπου ταινίας, για την ανίχνευση μονόκλωνης και δίκλωνης αλληλουχίας DNA. Για το τελευταίο επιλέχθηκε η ενισχυμένη αλληλουχία του εσωτερικού προτύπου του γονιδίου της πρωτεΐνης HRPT1. Το φθορίζον σήμα λήφθηκε με τη βοήθεια μιας διάταξης ενός σκοτεινού κουτιού, στο οποίο περιλαμβάνεται μια πηγή διεγείρουσας UV ακτινοβολίας και μια κοινή ψηφιακή φωτογραφική μηχανή.
Σε δεύτερο στάδιο, ο ίδιος βιοαισθητήρας εξετάστηκε στην ανίχνευση των προϊόντων PCR ειδικών αλληλουχιών τεσσάρων ειδών κρέατος: χοίρου, αμνού, βοοειδούς και αλόγου και με ιχνηθέτη τα νανοσωματίδια χρυσού. Προκειμένου να εφαρμοστεί σε δοκιμές ταυτοποίησης νοθείας του κρέατος, πραγματοποιήθηκαν, επίσης, δοκιμασίες ανίχνευσης μικρών ποσοστών DNA αλόγου σε βόειο DNA, και DNA χοίρου σε DNA αμνού. Οι ταινίες του βιοαισθητήρα και οι ερυθρές ζώνες που σχηματίζονται, φωτογραφήθηκαν, έπειτα, από μια κοινή φωτογραφική μηχανή.
Τέλος, ένας ακόμα τύπος βιοαισθητήρα αναπτύχθηκε με τη χρήση πολυτετραφθοροαιθυλενίου (τεφλόν) ως στερεό υπόστρωμα για την ακινητοποίηση (υπό μορφής κηλίδας) και ανίχνευση της βιοτινυλιωμένης πρωτεΐνης BSA με τη φθορίζουσα χρωστική ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) και το σύζευγμά της με τη στρεπταβιδίνη. Ο εκπεμπόμενος φθορισμός λήφθηκε με μια κοινή ψηφιακή φωτογραφική μηχανή.
|
|---|
