Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus
Στο πλαίσιο της παρούσας μεταπτυχιακής εργασίας πραγματοποιήθηκε μελέτη του ζυγωτικά εκφραζόμενου μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF και της επίδρασής του στο εμβρυικό νευρικό σύστημα του αχινού Paracentrotus lividus. Προς αυτό το σκοπό επιχειρήθηκε η καταστολή της έκφρασης του ζυγωτικού Coup-TF με δύο...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2020
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/13074 |
| id |
nemertes-10889-13074 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Μεταγραφικός παράγοντας Αχινός Γονιδιακή ρύθμιση Νευρογένεση Transcription factor Coup-TF Sea urchin Gene regulation Neurogenesis |
| spellingShingle |
Μεταγραφικός παράγοντας Αχινός Γονιδιακή ρύθμιση Νευρογένεση Transcription factor Coup-TF Sea urchin Gene regulation Neurogenesis Παπαδοπούλου, Θεοδώρα Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus |
| description |
Στο πλαίσιο της παρούσας μεταπτυχιακής εργασίας πραγματοποιήθηκε μελέτη του ζυγωτικά εκφραζόμενου μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF και της επίδρασής του στο εμβρυικό νευρικό σύστημα του αχινού Paracentrotus lividus. Προς αυτό το σκοπό επιχειρήθηκε η καταστολή της έκφρασης του ζυγωτικού Coup-TF με δύο διαφορετικά αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια που εμποδίζουν αμφότερα τη διενέργεια ματίσματος (splice-blocking morpholinos) σε εσόνια του πρώιμου μετάγραφου του Coup-TF. Παράλληλα, πραγματοποιήθηκε και καταστολή της έκφρασης του μητρικού Coup-TF με αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια που εμποδίζουν την έναρξη της μετάφρασης του ώριμου mRNA (translation-blocking morpholino). Τα αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια, καθώς και το διάλυμα ελέγχου, εισήχθησαν με μικροένεση σε ωάρια, τα οποία μετά τη γονιμοποίηση αφέθηκαν να αναπτυχθούν για 24 ώρες. Ενεμένα και μη ενεμένα έμβρυα συλλέχθηκαν και μονιμοποιήθηκαν για τη διεξαγωγή in situ υβριδοποίησης με τους κατάλληλους ανιχνευτές, ώστε να ελεγχθεί η έκφραση των γονιδίων που διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στη νευρογένεση του εμβρύου του αχινού. Τα γονίδια που επιλέχθηκαν είναι τα FoxG και Onecut/Hnf6 τα οποία αποτελούν δείκτες της βλεφαριδωτής ζώνης και είναι απαραίτητα για τον καθορισμό της, τα γονίδια FoxQ2 και Six3 που αποτελούν δείκτες του πρόσθιου νευροεξωδέρματος και είναι απαραίτητα για τον καθορισμό του και τα γονίδια Sip1 και SoxC που αποτελούν δείκτες πρόδρομων και προγονικών νευρικών κυττάρων αντίστοιχα. Τα γονίδια που παρουσίασαν αλλαγές στο πρότυπο έκφρασής τους είναι τα FoxG, Hnf6 και Sip1. Πιο συγκεκριμένα η καταστολή του ζυγωτικά εκφραζόμενου Coup-TF οδήγησε σε εκτοπική έκφραση των γονιδίων FoxG και Sip1 και σε καταστολή της έκφρασης του γονιδίου Onecut/Hnf6. Επιπρόσθετα, προκειμένου να πραγματοποιηθεί καταστολή της έκφρασης του γονιδίου Coup-TF μέσω του συστήματος Crispr-Cas9, σχεδιάστηκαν και παρασκευάστηκαν τα αναγκαία υλικά (Cas9 mRNA, gRNAs) που στη συνέχεια χορηγήθηκαν με ένεση σε ωάρια για την μετάλλαξη του γονιδίου Coup-TF. |
| author2 |
Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος |
| author_facet |
Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Παπαδοπούλου, Θεοδώρα |
| format |
Thesis |
| author |
Παπαδοπούλου, Θεοδώρα |
| author_sort |
Παπαδοπούλου, Θεοδώρα |
| title |
Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_short |
Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_full |
Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_fullStr |
Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_full_unstemmed |
Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus |
| title_sort |
ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα coup-tf στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού paracentrotus lividus |
| publishDate |
2020 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/13074 |
| work_keys_str_mv |
AT papadopouloutheodōra orolostēszygōtikēsekphrasēstoumetagraphikouparagontacouptfstonkathorismotōnembryikōnneurikōnkyttarōntouachinouparacentrotuslividus AT papadopouloutheodōra theroleofzygoticallyexpressedtranscriptionfactorcouptfanditsimpactontheembryonicnervoussystemoftheseaurchinparacentrotuslividus |
| _version_ |
1771297188452761600 |
| spelling |
nemertes-10889-130742022-09-05T09:40:55Z Ο ρόλος της ζυγωτικής έκφρασης του μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF στον καθορισμό των εμβρυικών νευρικών κυττάρων του αχινού Paracentrotus lividus The role of zygotically expressed transcription factor Coup-TF and its impact on the embryonic nervous system of the sea urchin Paracentrotus lividus Παπαδοπούλου, Θεοδώρα Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Κατσώρης, Παναγιώτης Καζάνης, Ηλίας Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Papadopoulou, Theodora Μεταγραφικός παράγοντας Αχινός Γονιδιακή ρύθμιση Νευρογένεση Transcription factor Coup-TF Sea urchin Gene regulation Neurogenesis Στο πλαίσιο της παρούσας μεταπτυχιακής εργασίας πραγματοποιήθηκε μελέτη του ζυγωτικά εκφραζόμενου μεταγραφικού παράγοντα Coup-TF και της επίδρασής του στο εμβρυικό νευρικό σύστημα του αχινού Paracentrotus lividus. Προς αυτό το σκοπό επιχειρήθηκε η καταστολή της έκφρασης του ζυγωτικού Coup-TF με δύο διαφορετικά αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια που εμποδίζουν αμφότερα τη διενέργεια ματίσματος (splice-blocking morpholinos) σε εσόνια του πρώιμου μετάγραφου του Coup-TF. Παράλληλα, πραγματοποιήθηκε και καταστολή της έκφρασης του μητρικού Coup-TF με αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια που εμποδίζουν την έναρξη της μετάφρασης του ώριμου mRNA (translation-blocking morpholino). Τα αντινοηματικά ολιγονουκλεοτίδια, καθώς και το διάλυμα ελέγχου, εισήχθησαν με μικροένεση σε ωάρια, τα οποία μετά τη γονιμοποίηση αφέθηκαν να αναπτυχθούν για 24 ώρες. Ενεμένα και μη ενεμένα έμβρυα συλλέχθηκαν και μονιμοποιήθηκαν για τη διεξαγωγή in situ υβριδοποίησης με τους κατάλληλους ανιχνευτές, ώστε να ελεγχθεί η έκφραση των γονιδίων που διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στη νευρογένεση του εμβρύου του αχινού. Τα γονίδια που επιλέχθηκαν είναι τα FoxG και Onecut/Hnf6 τα οποία αποτελούν δείκτες της βλεφαριδωτής ζώνης και είναι απαραίτητα για τον καθορισμό της, τα γονίδια FoxQ2 και Six3 που αποτελούν δείκτες του πρόσθιου νευροεξωδέρματος και είναι απαραίτητα για τον καθορισμό του και τα γονίδια Sip1 και SoxC που αποτελούν δείκτες πρόδρομων και προγονικών νευρικών κυττάρων αντίστοιχα. Τα γονίδια που παρουσίασαν αλλαγές στο πρότυπο έκφρασής τους είναι τα FoxG, Hnf6 και Sip1. Πιο συγκεκριμένα η καταστολή του ζυγωτικά εκφραζόμενου Coup-TF οδήγησε σε εκτοπική έκφραση των γονιδίων FoxG και Sip1 και σε καταστολή της έκφρασης του γονιδίου Onecut/Hnf6. Επιπρόσθετα, προκειμένου να πραγματοποιηθεί καταστολή της έκφρασης του γονιδίου Coup-TF μέσω του συστήματος Crispr-Cas9, σχεδιάστηκαν και παρασκευάστηκαν τα αναγκαία υλικά (Cas9 mRNA, gRNAs) που στη συνέχεια χορηγήθηκαν με ένεση σε ωάρια για την μετάλλαξη του γονιδίου Coup-TF. In the context of this postgraduate thesis, research has been conducted in order to define the role of zygotically expressed transcription factor Coup-TF and its impact on the embryonic nervous system of the sea urchin Paracentrotus lividus. For this purpose, we knocked down the expression of the zygotic Coup- TF with two different antisense oligos, which block splicing (splice-blocking morpholinos) of two introns of Coup-TF’s pre-mRNA. We also knocked down the expression of maternal Coup-TF with the use of an antisense morpholino which blocks the mRNA’s translation (translation-blocking morpholino). Antisense oligonucleotides, as well as control solution were introduced via microinjection into eggs that developed for twenty four hours after fertilization. Injected and uninjected embryos were collected and fixed in order to perform in situ hybridization with the appropriate probes, to define the expression of genes that contribute to neurogenesis of the sea urchin embryo. The genes that were selected are FoxG and Hnf6, which constitute markers of the ciliary band and are necessary for its determination, FoxQ2 and Six3 which constitute markers of anterior neuroectoderm and are necessary for its determination, as well as the genes Sip1 and SoxC that constitute markers of precursor and progenitor nerve cells respectively. The genes which displayed changes in the pattern of their expression are FoxG, Hnf6 and Sip1. More specifically, the suppression of zygotically expressed Coup-TF led to ectopic expression of genes FoxG and Sip1 in the whole embryo and suppression of Onecut/Hnf6. Furthermore, to perform knock-out of the Coup-TF gene expression with the Crispr-Cas9 system, the necessary constructs were designed and produced and were injected into eggs for the mutation of the Coup- TF gene. 2020-02-06T20:19:59Z 2020-02-06T20:19:59Z 2019-11-11 Thesis http://hdl.handle.net/10889/13074 gr 0 application/pdf |
