| Περίληψη: | Οι μηχανισμοί που καθορίζουν την ενζυμική δραστικότητα και την εξειδίκευση
υποστρώματος αποτελούν καίρια ερώτηση, όχι μόνο για την κατανόηση της λειτουργικής
οργάνωσης των βιολογικών συστημάτων, αλλά ακόμα περισσότερο για την ανάπτυξη
αποτελεσματικών διαγνωστικών και θεραπευτικών εργαλείων. Οι μηχανισμοί αναγνώρισης
υποστρώματος καθορίζονται κυρίως από τη δομική συμπληρωματικότητα των μορίων που
συμμετέχουν στην αντίδραση. Ωστόσο, πιστεύεται ότι απαιτούνται επιπλέον παράμετροι,
πέραν εκείνων που περιορίζονται στο σύμπλοκο ενζύμου-υποστρώματος, για την υψηλή
πιστότητα των ενζυμικών αντιδράσεων.
Στην παρούσα μεταπτυχιακή διατριβή πραγματοποιείται η ανάπτυξη Τ κυτταρικών
σειρών με ξεχωριστή επαγόμενη έκφραση τεσσάρων κινασών της εξελικτικά συντηρημένης
οικογένειας των Src. Στο παραπάνω πειραματικό σύστημα αρχικά γίνεται έλεγχος της
ενζυμικής δραστικότητας των τεσσάρων επαγόμενων κινασών Lck, Src, Fyn και Lyn, μέσα σε
άθικτα μονιμοποιημένα κύτταρα, με χρήση κυτταρομετρίας ροής. Στη συνέχεια, έγινε η
ανάλυση των κυτταρικών σειρών που εκφράζουν την Lck και την Src αντίστοιχα, ως προς την
ικανότητά τους να φωσφορυλιώσουν τα ITAMs του T υποδοχέα, τα οποία αποτελούν
φυσιολογικό υπόστρωμα της Lck κινάσης. Τα δεδομένα έδειξαν ότι η Src κινάση αδυνατεί να
φωσφορυλιώσει τα ITAMs του T υποδοχέα, ύστερα από τη διέγερσή του, παρόλη την
εξαιρετικά μεγάλη αμινοξική ομολογία που παρουσιάζει το καταλυτικό της κέντρο
συγκριτικά με αυτό της Lck. Τα αποτελέσματα αυτά γεννούν ερωτήματα όσον αφορά τους
καθοριστικούς παράγοντες που αποδίδουν αυτή την ενζυμική εξειδίκευση και την
καταλυτική αποτελεσματικότητα. Για την απάντηση των ερωτημάτων αυτών, το παραπάνω
πειραματικό σύστημα θα χρησιμοποιηθεί εκτενέστερα για τη πιο ολοκληρωμένη σύγκριση
των τεσσάρων συγγενικών κινασών.
|
|---|
