Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK
Οι μηχανισμοί που καθορίζουν την ενζυμική δραστικότητα και την εξειδίκευση υποστρώματος αποτελούν καίρια ερώτηση, όχι μόνο για την κατανόηση της λειτουργικής οργάνωσης των βιολογικών συστημάτων, αλλά ακόμα περισσότερο για την ανάπτυξη αποτελεσματικών διαγνωστικών και θεραπευτικών εργαλείων. Οι μη...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2020
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/13188 |
| id |
nemertes-10889-13188 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nemertes-10889-131882022-09-05T06:58:05Z Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK Identification of determinants attributing SFK kinases substrate specificity Κούτρας, Νικόλαος Νίκα, Κωνσταντίνα Σπυριδωνίδης, Αλέξανδρος Σταθόπουλος, Κωνσταντίνος Koutras, Nikolaos Κινάση Φωσφορυλίωση Τυροσίνη Τ κυτταρικός υποδοχέας Kinase Phosphorylation Tyrosine Itams Τ cell receptor Οι μηχανισμοί που καθορίζουν την ενζυμική δραστικότητα και την εξειδίκευση υποστρώματος αποτελούν καίρια ερώτηση, όχι μόνο για την κατανόηση της λειτουργικής οργάνωσης των βιολογικών συστημάτων, αλλά ακόμα περισσότερο για την ανάπτυξη αποτελεσματικών διαγνωστικών και θεραπευτικών εργαλείων. Οι μηχανισμοί αναγνώρισης υποστρώματος καθορίζονται κυρίως από τη δομική συμπληρωματικότητα των μορίων που συμμετέχουν στην αντίδραση. Ωστόσο, πιστεύεται ότι απαιτούνται επιπλέον παράμετροι, πέραν εκείνων που περιορίζονται στο σύμπλοκο ενζύμου-υποστρώματος, για την υψηλή πιστότητα των ενζυμικών αντιδράσεων. Στην παρούσα μεταπτυχιακή διατριβή πραγματοποιείται η ανάπτυξη Τ κυτταρικών σειρών με ξεχωριστή επαγόμενη έκφραση τεσσάρων κινασών της εξελικτικά συντηρημένης οικογένειας των Src. Στο παραπάνω πειραματικό σύστημα αρχικά γίνεται έλεγχος της ενζυμικής δραστικότητας των τεσσάρων επαγόμενων κινασών Lck, Src, Fyn και Lyn, μέσα σε άθικτα μονιμοποιημένα κύτταρα, με χρήση κυτταρομετρίας ροής. Στη συνέχεια, έγινε η ανάλυση των κυτταρικών σειρών που εκφράζουν την Lck και την Src αντίστοιχα, ως προς την ικανότητά τους να φωσφορυλιώσουν τα ITAMs του T υποδοχέα, τα οποία αποτελούν φυσιολογικό υπόστρωμα της Lck κινάσης. Τα δεδομένα έδειξαν ότι η Src κινάση αδυνατεί να φωσφορυλιώσει τα ITAMs του T υποδοχέα, ύστερα από τη διέγερσή του, παρόλη την εξαιρετικά μεγάλη αμινοξική ομολογία που παρουσιάζει το καταλυτικό της κέντρο συγκριτικά με αυτό της Lck. Τα αποτελέσματα αυτά γεννούν ερωτήματα όσον αφορά τους καθοριστικούς παράγοντες που αποδίδουν αυτή την ενζυμική εξειδίκευση και την καταλυτική αποτελεσματικότητα. Για την απάντηση των ερωτημάτων αυτών, το παραπάνω πειραματικό σύστημα θα χρησιμοποιηθεί εκτενέστερα για τη πιο ολοκληρωμένη σύγκριση των τεσσάρων συγγενικών κινασών. The question of mechanisms that govern enzymatic activity and substrate specificity remains central not only for understanding the functional organization of biological systems but importantly for the development of effective diagnostic and therapeutic tools. Substrate recognition mechanisms are principally governed by the structural complementarity of the molecular partners. However, it is an emerging notion that additional parameters besides those restricted within the enzyme-substrate complex, are required for the high fidelity of enzymatic reactions. In the present Master thesis, we have developed T cell lines in which four kinases of the evolutionary conserved Src family are inducibly and separately expressed. Firstly, in this experimental system it was analyzed by flow cytometry the enzymatic activity of the four inducible kinases Lck, Src, Fyn and Lyn within intact fixed cells. Subsequently, cell lines expressing Lck and Src respectively, were analyzed for their capacity to phosphorylate the ITAMs of the T cell receptor, which are the physiological substrate of Lck. Data revealed that Src is unable to phosphorylate T cell receptor ITAMs, after stimulation, despite the remarkable amino acid homology representing in its catalytic center compared to that of Lck. These results raise questions about the determinants of enzyme specificity and catalytic efficiency. To answer these questions, this experimental platform will be used more extensively for a more comprehensive comparison of the four kinases. 2020-02-06T23:11:52Z 2020-02-06T23:11:52Z 2020-01-07 Thesis http://hdl.handle.net/10889/13188 gr 0 application/pdf |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Κινάση Φωσφορυλίωση Τυροσίνη Τ κυτταρικός υποδοχέας Kinase Phosphorylation Tyrosine Itams Τ cell receptor |
| spellingShingle |
Κινάση Φωσφορυλίωση Τυροσίνη Τ κυτταρικός υποδοχέας Kinase Phosphorylation Tyrosine Itams Τ cell receptor Κούτρας, Νικόλαος Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK |
| description |
Οι μηχανισμοί που καθορίζουν την ενζυμική δραστικότητα και την εξειδίκευση
υποστρώματος αποτελούν καίρια ερώτηση, όχι μόνο για την κατανόηση της λειτουργικής
οργάνωσης των βιολογικών συστημάτων, αλλά ακόμα περισσότερο για την ανάπτυξη
αποτελεσματικών διαγνωστικών και θεραπευτικών εργαλείων. Οι μηχανισμοί αναγνώρισης
υποστρώματος καθορίζονται κυρίως από τη δομική συμπληρωματικότητα των μορίων που
συμμετέχουν στην αντίδραση. Ωστόσο, πιστεύεται ότι απαιτούνται επιπλέον παράμετροι,
πέραν εκείνων που περιορίζονται στο σύμπλοκο ενζύμου-υποστρώματος, για την υψηλή
πιστότητα των ενζυμικών αντιδράσεων.
Στην παρούσα μεταπτυχιακή διατριβή πραγματοποιείται η ανάπτυξη Τ κυτταρικών
σειρών με ξεχωριστή επαγόμενη έκφραση τεσσάρων κινασών της εξελικτικά συντηρημένης
οικογένειας των Src. Στο παραπάνω πειραματικό σύστημα αρχικά γίνεται έλεγχος της
ενζυμικής δραστικότητας των τεσσάρων επαγόμενων κινασών Lck, Src, Fyn και Lyn, μέσα σε
άθικτα μονιμοποιημένα κύτταρα, με χρήση κυτταρομετρίας ροής. Στη συνέχεια, έγινε η
ανάλυση των κυτταρικών σειρών που εκφράζουν την Lck και την Src αντίστοιχα, ως προς την
ικανότητά τους να φωσφορυλιώσουν τα ITAMs του T υποδοχέα, τα οποία αποτελούν
φυσιολογικό υπόστρωμα της Lck κινάσης. Τα δεδομένα έδειξαν ότι η Src κινάση αδυνατεί να
φωσφορυλιώσει τα ITAMs του T υποδοχέα, ύστερα από τη διέγερσή του, παρόλη την
εξαιρετικά μεγάλη αμινοξική ομολογία που παρουσιάζει το καταλυτικό της κέντρο
συγκριτικά με αυτό της Lck. Τα αποτελέσματα αυτά γεννούν ερωτήματα όσον αφορά τους
καθοριστικούς παράγοντες που αποδίδουν αυτή την ενζυμική εξειδίκευση και την
καταλυτική αποτελεσματικότητα. Για την απάντηση των ερωτημάτων αυτών, το παραπάνω
πειραματικό σύστημα θα χρησιμοποιηθεί εκτενέστερα για τη πιο ολοκληρωμένη σύγκριση
των τεσσάρων συγγενικών κινασών. |
| author2 |
Νίκα, Κωνσταντίνα |
| author_facet |
Νίκα, Κωνσταντίνα Κούτρας, Νικόλαος |
| format |
Thesis |
| author |
Κούτρας, Νικόλαος |
| author_sort |
Κούτρας, Νικόλαος |
| title |
Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK |
| title_short |
Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK |
| title_full |
Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK |
| title_fullStr |
Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK |
| title_full_unstemmed |
Ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας SFK |
| title_sort |
ταυτοποίηση των καθοριστικών παραγόντων που αποδίδουν την εξειδίκευση υποστρώματος των κινασών της οικογένειας sfk |
| publishDate |
2020 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/13188 |
| work_keys_str_mv |
AT koutrasnikolaos tautopoiēsētōnkathoristikōnparagontōnpouapodidountēnexeidikeusēypostrōmatostōnkinasōntēsoikogeneiassfk AT koutrasnikolaos identificationofdeterminantsattributingsfkkinasessubstratespecificity |
| _version_ |
1771297176180228096 |
