Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων
Πρωτεΐνες και DNA αποτελούν αντικείμενα της έντονης ερευνητικής δραστηριότητας, που αναπτύσσεται ραγδαία τα τελευταία χρόνια. Η αξιοποίησή τους κρίνεται απαραίτητη για την ανάπτυξη σύγχρονων μεθόδων χημικής ανάλυσης. Μια ειδική κατηγορία πρωτεϊνών, οι φωτοπρωτεΐνες, παρουσιάζουν έντονο ενδιαφέρον...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2020
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/13475 |
| id |
nemertes-10889-13475 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| spelling |
nemertes-10889-134752022-09-05T06:58:45Z Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων Synthesis of recombinant proteins and study of nucleic acids isolation techniques Αβδελιώδη, Ευτέρπη Avdeliodi, Efterpi Χημειοφωταύγεια Φωτοπρωτεΐνες Αικουορίνη Απομόνωση DNA Chemiluminescence Photoproteins Aequorin DNA isolation Πρωτεΐνες και DNA αποτελούν αντικείμενα της έντονης ερευνητικής δραστηριότητας, που αναπτύσσεται ραγδαία τα τελευταία χρόνια. Η αξιοποίησή τους κρίνεται απαραίτητη για την ανάπτυξη σύγχρονων μεθόδων χημικής ανάλυσης. Μια ειδική κατηγορία πρωτεϊνών, οι φωτοπρωτεΐνες, παρουσιάζουν έντονο ενδιαφέρον, καθώς είναι μόρια, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως ιχνηθέτες, δεδομένου ότι εκπέμπουν έντονο φως χημειοφωταύγειας. Το αντικείμενο της παρούσας μεταπτυχιακής διπλωματικής εργασίας είναι η έκφραση φωτοπρωτεϊνών σε βακτήρια, καθώς και η μελέτη απομόνωσης DNA από φυτικό ιστό (φύλλα ελιάς). Πιο συγκεκριμένα, στην παρούσα ΜΔΕ παρατίθενται τα εξής: (I) Έκφραση, απομόνωση και καθαρισμός της πρωτεΐνης, Αικουορίνης. Αρχικά, εκφράζεται η αποπρωτεΐνη, Αποαικουορίνη, από μετασχηματισμένα βακτηριακά στελέχη Escherichia coli. Ο μετασχηματισμός επιτυγχάνεται εισάγοντας στο βακτηριακό κύτταρο τον ειδικό πλασμιδιακό φορέα, ο οποίος φέρει της κατάλληλες αλληλουχίες έκφρασης της φωτοπρωτεΐνης. Στη συνέχεια, πραγματοποιείται απομόνωση της Αποαικουορίνης, χρησιμοποιώντας την χρωματογραφία συγγένειας ακινητοποιημένου μετάλλου. Τέλος, πραγματοποιείται η ενεργοποίηση της Αικουορίνης με την προσθήκη σελεντεραζίνης ως υποστρώματος και μετράται η ενεργότητά της παρουσία ιόντων Ca2+. (II) Η απομόνωση του DNA από φυτικό ιστό (φύλλα ελιάς) χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο CTAB, και οι διάφορες δοκιμές ενίσχυσης του DNA με την τεχνική της PCR, οδηγεί στην εύρεση των βέλτιστων συνθηκών για την τελική ανίχνευση των προϊόντων PCR. Proteins and DNA have become the focus of intense research activity, which has grown rapidly in recent years. Their use is essential for the development or evolution of modern methods of chemical analysis. A certain group of proteins, photoproteins, are particularly interesting, because they are molecules, which can emit chemiluminescent light. This attribute makes photoproteins exceptionally useful as analytical probes. The objective of the present Master’s Thesis is the overexpression of photoproteins in bacteria, and the study of DNA isolation from plant tissue (olive leaves). More specifically, this thesis includes the following: (I) Overexpression, isolation and purification of photoprotein, Aequorin. For a start, the apoprotein, Apoaequorin, is overexpressed by transformed Escherichia coli bacterial strains. Transformation is successful by introducing the specific plasmid vector into the bacterial cell. The plasmid vector includes the special photoprotein expression sequences. After that, Apoaequorin is isolated by immobilized metal ion affinity chromatography. Finally, Aequorin is activated by the addition of coelenterazine as a substrate and its activity is measured in the presence of Ca2+ ions. (II) Isolation of DNA from plant tissue (olive leaves) using the CTAB reagent, and various DNA amplification tests by PCR technique, leads to the finding of optimal conditions for the final detection of PCR products. 2020-06-22T11:33:26Z 2020-06-22T11:33:26Z 2020-05-18 http://hdl.handle.net/10889/13475 gr application/pdf |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Χημειοφωταύγεια Φωτοπρωτεΐνες Αικουορίνη Απομόνωση DNA Chemiluminescence Photoproteins Aequorin DNA isolation |
| spellingShingle |
Χημειοφωταύγεια Φωτοπρωτεΐνες Αικουορίνη Απομόνωση DNA Chemiluminescence Photoproteins Aequorin DNA isolation Αβδελιώδη, Ευτέρπη Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| description |
Πρωτεΐνες και DNA αποτελούν αντικείμενα της έντονης ερευνητικής δραστηριότητας,
που αναπτύσσεται ραγδαία τα τελευταία χρόνια. Η αξιοποίησή τους κρίνεται
απαραίτητη για την ανάπτυξη σύγχρονων μεθόδων χημικής ανάλυσης. Μια ειδική
κατηγορία πρωτεϊνών, οι φωτοπρωτεΐνες, παρουσιάζουν έντονο ενδιαφέρον, καθώς
είναι μόρια, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως ιχνηθέτες, δεδομένου ότι
εκπέμπουν έντονο φως χημειοφωταύγειας.
Το αντικείμενο της παρούσας μεταπτυχιακής διπλωματικής εργασίας είναι η έκφραση
φωτοπρωτεϊνών σε βακτήρια, καθώς και η μελέτη απομόνωσης DNA από φυτικό ιστό
(φύλλα ελιάς).
Πιο συγκεκριμένα, στην παρούσα ΜΔΕ παρατίθενται τα εξής:
(I) Έκφραση, απομόνωση και καθαρισμός της πρωτεΐνης, Αικουορίνης. Αρχικά,
εκφράζεται η αποπρωτεΐνη, Αποαικουορίνη, από μετασχηματισμένα βακτηριακά
στελέχη Escherichia coli. Ο μετασχηματισμός επιτυγχάνεται εισάγοντας στο
βακτηριακό κύτταρο τον ειδικό πλασμιδιακό φορέα, ο οποίος φέρει της κατάλληλες
αλληλουχίες έκφρασης της φωτοπρωτεΐνης. Στη συνέχεια, πραγματοποιείται
απομόνωση της Αποαικουορίνης, χρησιμοποιώντας την χρωματογραφία συγγένειας
ακινητοποιημένου μετάλλου. Τέλος, πραγματοποιείται η ενεργοποίηση της
Αικουορίνης με την προσθήκη σελεντεραζίνης ως υποστρώματος και μετράται η
ενεργότητά της παρουσία ιόντων Ca2+.
(II) Η απομόνωση του DNA από φυτικό ιστό (φύλλα ελιάς) χρησιμοποιώντας το
αντιδραστήριο CTAB, και οι διάφορες δοκιμές ενίσχυσης του DNA με την τεχνική της
PCR, οδηγεί στην εύρεση των βέλτιστων συνθηκών για την τελική ανίχνευση των
προϊόντων PCR. |
| author2 |
Avdeliodi, Efterpi |
| author_facet |
Avdeliodi, Efterpi Αβδελιώδη, Ευτέρπη |
| author |
Αβδελιώδη, Ευτέρπη |
| author_sort |
Αβδελιώδη, Ευτέρπη |
| title |
Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| title_short |
Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| title_full |
Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| title_fullStr |
Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| title_full_unstemmed |
Παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| title_sort |
παρασκευή ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών και μελέτη τεχνικών απομόνωσης νουκλεϊκών οξέων |
| publishDate |
2020 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/13475 |
| work_keys_str_mv |
AT abdeliōdēeuterpē paraskeuēanasyndyasmenōnprōteïnōnkaimeletētechnikōnapomonōsēsnoukleïkōnoxeōn AT abdeliōdēeuterpē synthesisofrecombinantproteinsandstudyofnucleicacidsisolationtechniques |
| _version_ |
1771297175254335488 |
