Κλωνοποίηση χιμαιρικών γονιδίων της Lck σε σύστημα επαγόμενης έκφρασης σε ευκαρυωτικά κύτταρα

• Κύριος συγγραφέας: Κωνσταντίνου, Δημήτριος
• Άλλοι συγγραφείς: Konstantinou, Dimitrios
• Γλώσσα: Greek
• Έκδοση: 2020
• Θέματα: Χιμαιρικά γονίδια; Θεραπευτικές στρατηγικές; Src family kinase; Immunoreceptor tyrosine-based activation motif

Η στοχευμένη παρέμβαση στη λειτουργία των βασικών μορίων σηματοδότησης είναι το επίκεντρο των τρεχουσών θεραπευτικών στρατηγικών ενάντια σε μια ποικιλία παθολογικών καταστάσεων. Οι Src family kinases (SFK) έχουν θεμελιώδεις ρόλους στην ενεργοποίηση κυτταρικών οδών που ρυθμίζουν την ανάπτυξη των κυττάρων, την επιβίωση, τη διαφοροποίηση και τη μετανάστευση. Η απορρύθμιση της δραστηριότητας των Src family kinases έχει συνδεθεί με έναν αριθμό παθολογικών καταστάσεων, συμπεριλαμβανομένων αυτοάνοσων και φλεγμονωδών ασθενειών. Επιπλέον, αρκετά μέλη της οικογένειας, ειδικά οι Src και Lck, είναι ισχυρά ογκογονίδια με εξέχοντες ρόλους στην εισβολή του όγκου, την εξέλιξη και την ανάπτυξη μετάστασης. Κατά συνέπεια, περιλαμβάνουν σημαντικούς θεραπευτικούς στόχους και ένας αριθμός αναστολέων των SFK χρησιμοποιούνται επί του παρόντος ή διερευνούνται σε κλινικές δοκιμές. Ωστόσο, η ακολουθία και η δομική ομολογία εντός των καταλυτικών θυλάκων αυτών των ενζύμων παρουσιάζει σημαντικά εμπόδια στην ανάπτυξη εξαιρετικά επιλεκτικών ενώσεων. Λαμβάνοντας υπόψη τις πλειοτροπικές λειτουργίες των SFK σε μια ποικιλία κυτταρικών περιβαλλόντων, η επιλεκτικότητα είναι επιτακτική προκειμένου να περιοριστεί η τοξικότητα ή έλλειψη φαρμακευτικής αποτελεσματικότητας και η εμφάνιση αντοχής στα φάρμακα. Πράγματι, ο τομέας της έρευνας εστιάζει όλο και περισσότερο στον εντοπισμό εγγενών μοριακών στοιχείων που παρέχουν μοναδικά χαρακτηριστικά μεταξύ αυτών των ενζύμων, τα οποία μπορούν να αξιοποιηθούν για το σχεδιασμό συγκεκριμένων στοχευμένων θεραπευτικών προσεγγίσεων. Σε αυτή την κατεύθυνση, η παρούσα ερευνητική πρόταση στοχεύει να θέσει τις βάσεις για πιο λεπτομερείς μελλοντικές μελέτες, στον εντοπισμό εγγενών δομικών χαρακτηριστικών εντός των SFKs, υπεύθυνων για την διάκριση του υποστρώματος. Συλλογικά, αυτή η έρευνα θα μπορεί να συμβάλει στη βελτίωση της εξειδίκευσης και της αποτελεσματικότητας των θεραπευτικών στρατηγικών, οι οποίες στοχεύουν τη δραστηριότητα των SFK. Στην παρούσα διπλωματική εργασία δημιουργήθηκαν χιμαιρικές μορφές της Lck με τροποποιημένο υποκυτταρικό εντοπισμό δημιουργώντας, με την μέθοδο Πολυσιδωτής Αντίδρασης Πολυμεράσης, τα χιμαιρικά γονίδια Src-Lck, Fyn-Lck και Lyn-Lck. Επιπλέον, με τον ίδιο τρόπο, δημιουργήθηκαν τρία χιμαιρικά γονίδια με την ίδια αμινοξική αλληλουχία στο Ν-τελικό τους άκρο, που είναι υπεύθυνη για την μεμβρανική τους τοποθέτηση, η LckSH4-Src, η LckSH4-Fyn και η LckSH4-Lyn.