Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου
Η πρωτεΐνη Geminin εμπλέκεται στη ρύθμιση της κυτταρικής διαίρεσης και διαφοροποίησης αλληλοεπιδρώντας με πληθώρα μορίων επηρεάζοντας σημαντικά την κυτταρική λειτουργία. Βασικός ρόλος της Geminin είναι η αναστολή της δράσης της πρωτεΐνης CDT1 που αποτελεί ρυθμιστικό παράγοντα στην αδειοδότηση της αν...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2021
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/14477 |
| id |
nemertes-10889-14477 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Πρωτεΐνη Geminin Κυτταρική διαίρεση Geminin DNA CDT1 |
| spellingShingle |
Πρωτεΐνη Geminin Κυτταρική διαίρεση Geminin DNA CDT1 Δαναλάτος, Ιωσήφ Ροδόλφος Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| description |
Η πρωτεΐνη Geminin εμπλέκεται στη ρύθμιση της κυτταρικής διαίρεσης και διαφοροποίησης αλληλοεπιδρώντας με πληθώρα μορίων επηρεάζοντας σημαντικά την κυτταρική λειτουργία. Βασικός ρόλος της Geminin είναι η αναστολή της δράσης της πρωτεΐνης CDT1 που αποτελεί ρυθμιστικό παράγοντα στην αδειοδότηση της αντιγραφής του DNA. Πρόσδεση της Geminin στο CDT1, αναστέλλει το σχηματισμό του προαντιγραφικού συμπλόκου που συγκροτείται στα σημεία έναρξης της αντιγραφής κατά την αδειοδότησή της. Ωστόσο, απορρύθμιση του συστήματος αδειοδότησης μπορεί να οδηγήσει σε γενωμική αστάθεια, ένα από τα κύρια χαρακτηριστικά του καρκίνου. Είναι πλέον γνωστό ότι η απαλοιφή της Geminin in vivo οδηγεί σε επαναντιγραφή και αυξημένη ογκογένεση, ενώ in vitro μελέτες αναφέρουν την υπερέκφραση του CDT1 ως κύριο αίτιο επαναντιγραφής.
Η παρούσα μελέτη εστιάζει στη διερεύνηση της αλληλεπίδρασης των πρωτεϊνών Geminin και CDT1 στην καρκινογένεση, καθώς και τη διερεύνηση του πρωτεϊνικού συμπλόκου ως πιθανό μοριακό στόχο της δράσης αντικαρκινικών ενώσεων. Προκειμένου να εξεταστεί ο ρόλος της αλληλεπίδρασής των δυο πρωτεϊνών in vivo, έγινε αποσιώπηση του γονιδίου της geminin και υπερέκφραση του CDT1 στα βλαστικά κύτταρα του παχέος εντέρου μυών και ακολούθησε χημική επαγωγή καρκίνου. Επιπλέον, ως εργαλείο μελέτης γενωμικής αστάθειας παρασκευάστηκαν πρωτογενείς καλλιέργειες εμβρυικών ινοβλαστών μυών, που υπερεκφράζουν τον παράγοντα CDT1 παρουσία ή απουσία Geminin, κατόπιν διαμόλυνσής τους με λεντι-ιούς ( Cre-LoxP σύστημα).
Λαμβάνοντας υπόψιν τόσο την απουσία ελέγχου κατά την αντιγραφή όσο και τη δυσλειτουργία των αντικαρκινικών κυτταρικών μηχανισμών ως κύρια χαρακτηριστικά του καρκίνου, πραγματοποιήθηκε σχεδιασμός και σύνθεση χημικών ενώσεων με στόχο την διατάραξη του συμπλόκου Geminin/CDT1. Ακολούθησε έλεγχος της δραστικότητας των παραπάνω ενώσεων με τη μέθοδο του Alphascreen προκειμένου να προσδιοριστεί η επίδρασή τους στο σύμπλοκο. |
| author2 |
Ταραβήρας, Σταύρος |
| author_facet |
Ταραβήρας, Σταύρος Δαναλάτος, Ιωσήφ Ροδόλφος |
| format |
Thesis |
| author |
Δαναλάτος, Ιωσήφ Ροδόλφος |
| author_sort |
Δαναλάτος, Ιωσήφ Ροδόλφος |
| title |
Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| title_short |
Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| title_full |
Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| title_fullStr |
Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| title_full_unstemmed |
Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| title_sort |
ο ρόλος των geminin και cdt1 στην επαγωγή βλαβών στο dna που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου |
| publishDate |
2021 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/14477 |
| work_keys_str_mv |
AT danalatosiōsēphrodolphos orolostōngemininkaicdt1stēnepagōgēblabōnstodnapousyndeontaimetēchēmikōsepagomenēkarkinogenesētoupacheosenterou AT danalatosiōsēphrodolphos theroleofgemininandcdt1indnadamagecorrelatedwithchemicallyinducedtumorigenesisinmousecolon |
| _version_ |
1771297292483035136 |
| spelling |
nemertes-10889-144772022-09-05T20:18:53Z Ο ρόλος των Geminin και CDT1 στην επαγωγή βλαβών στο DNA που συνδέονται με τη χημικώς επαγόμενη καρκινογένεση του παχέος εντέρου The role of Geminin and CDT1 in DNA damage correlated with chemically induced tumorigenesis in mouse colon Δαναλάτος, Ιωσήφ Ροδόλφος Ταραβήρας, Σταύρος Ταραβήρας, Σταύρος Λυγερού, Ζωή Μητσάκου, Αδαμαντία Danalatos, Iosif Rodolfos Πρωτεΐνη Geminin Κυτταρική διαίρεση Geminin DNA CDT1 Η πρωτεΐνη Geminin εμπλέκεται στη ρύθμιση της κυτταρικής διαίρεσης και διαφοροποίησης αλληλοεπιδρώντας με πληθώρα μορίων επηρεάζοντας σημαντικά την κυτταρική λειτουργία. Βασικός ρόλος της Geminin είναι η αναστολή της δράσης της πρωτεΐνης CDT1 που αποτελεί ρυθμιστικό παράγοντα στην αδειοδότηση της αντιγραφής του DNA. Πρόσδεση της Geminin στο CDT1, αναστέλλει το σχηματισμό του προαντιγραφικού συμπλόκου που συγκροτείται στα σημεία έναρξης της αντιγραφής κατά την αδειοδότησή της. Ωστόσο, απορρύθμιση του συστήματος αδειοδότησης μπορεί να οδηγήσει σε γενωμική αστάθεια, ένα από τα κύρια χαρακτηριστικά του καρκίνου. Είναι πλέον γνωστό ότι η απαλοιφή της Geminin in vivo οδηγεί σε επαναντιγραφή και αυξημένη ογκογένεση, ενώ in vitro μελέτες αναφέρουν την υπερέκφραση του CDT1 ως κύριο αίτιο επαναντιγραφής. Η παρούσα μελέτη εστιάζει στη διερεύνηση της αλληλεπίδρασης των πρωτεϊνών Geminin και CDT1 στην καρκινογένεση, καθώς και τη διερεύνηση του πρωτεϊνικού συμπλόκου ως πιθανό μοριακό στόχο της δράσης αντικαρκινικών ενώσεων. Προκειμένου να εξεταστεί ο ρόλος της αλληλεπίδρασής των δυο πρωτεϊνών in vivo, έγινε αποσιώπηση του γονιδίου της geminin και υπερέκφραση του CDT1 στα βλαστικά κύτταρα του παχέος εντέρου μυών και ακολούθησε χημική επαγωγή καρκίνου. Επιπλέον, ως εργαλείο μελέτης γενωμικής αστάθειας παρασκευάστηκαν πρωτογενείς καλλιέργειες εμβρυικών ινοβλαστών μυών, που υπερεκφράζουν τον παράγοντα CDT1 παρουσία ή απουσία Geminin, κατόπιν διαμόλυνσής τους με λεντι-ιούς ( Cre-LoxP σύστημα). Λαμβάνοντας υπόψιν τόσο την απουσία ελέγχου κατά την αντιγραφή όσο και τη δυσλειτουργία των αντικαρκινικών κυτταρικών μηχανισμών ως κύρια χαρακτηριστικά του καρκίνου, πραγματοποιήθηκε σχεδιασμός και σύνθεση χημικών ενώσεων με στόχο την διατάραξη του συμπλόκου Geminin/CDT1. Ακολούθησε έλεγχος της δραστικότητας των παραπάνω ενώσεων με τη μέθοδο του Alphascreen προκειμένου να προσδιοριστεί η επίδρασή τους στο σύμπλοκο. Geminin is involved in the cellular division and differentiation processes, interacting with a plethora of other molecules, influencing significantly the cellular functions. Its main role is the inhibition of CDT1, a protein factor with a major role in DNA replication licensing. The formation of the Geminin – CDT1 complex inhibits the formation of the Pre-Replicative complex, which is formed at the origins of replication during the licensing. It is noteworthy that deregulation of the licensing system leads to genomic instability, which is a hallmark of cancer. It has been shown that Geminin ablation in vivo leads to over-replication and increased tumorigenesis, while in vitro studies have found that CDT1 overexpression leads to overreplication as well. This study focuses on the investigation of the Geminin – CDT1 interaction in early tumorigenesis, as well as the protein complex as a biological target for chemical compounds with anti-cancer properties. In order to investigate the role of these proteins in vivo, mouse models with Geminin ablation and/or CDT1 overexpression, specifically at the intestinal stem cells, were treated with carcinogens to induce tumorigenesis in the colon. Additionally, in order to facilitate studies concerning the role of the Geminin – CDT1 interaction in Genomic instability, MEF (Murine Embryonic Fibroblast) cultures were generated. Employing the CreLoxP system, these cultures ablated Geminin and/or overexpressed CDT1 upon Lentivirus infection. Taking under consideration that the lack of replication licensing and tumor-suppressor mechanisms are hallmarks of cancer, a small library of compounds was designed and synthesized in order to disrupt the Geminin – CDT1 complex. The effect of these compounds was determined with an Alphascreen assay. 2021-02-15T11:32:57Z 2021-02-15T11:32:57Z 2020-02-10 Thesis http://hdl.handle.net/10889/14477 gr 12 application/pdf |
