Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden
Αντικείμενο της παρούσας διπλωματικής εργασίας αποτέλεσε το ενδημικό είδος της Πελοποννήσου Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, από το όρος Χελμός. Συγκεκριμένα, μελετήθηκε το πιο άπολο κλάσμα του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα των εναέριων τμημάτων του φυτού και πιο συγκεκριμένα ένα υποκλάσ...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2021
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/15145 |
| id |
nemertes-10889-15145 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Τσάι του βουνού Υγρή χρωματογραφία στήλης Φυσικά προϊόντα Διτερπένια Αντιχολινεστερασική δράση Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, Mountain tea Column chromatography UHPLC-DAD-ESI/MS Natural products Diterpenes Anticholinesterase activity |
| spellingShingle |
Τσάι του βουνού Υγρή χρωματογραφία στήλης Φυσικά προϊόντα Διτερπένια Αντιχολινεστερασική δράση Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, Mountain tea Column chromatography UHPLC-DAD-ESI/MS Natural products Diterpenes Anticholinesterase activity Μπισκίνης, Αντώνιος Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden |
| description |
Αντικείμενο της παρούσας διπλωματικής εργασίας αποτέλεσε το ενδημικό είδος της Πελοποννήσου Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, από το όρος Χελμός. Συγκεκριμένα, μελετήθηκε το πιο άπολο κλάσμα του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα των εναέριων τμημάτων του φυτού και πιο συγκεκριμένα ένα υποκλάσμα αυτού, με στόχο τον χαρακτηρισμό και απομόνωση όσων ενώσεων ήταν δυνατό και την αξιολόγηση των τελικών ενώσεων ή κλασμάτων ως προς την ικανότητά τους να αναστέλλουν το ένζυμο ακετυλοχολινεστεράση, που εμπλέκεται φαρμακολογικά στη νευροδιαβίβαση.
Προκειμένου να επιτευχθεί ο παραπάνω στόχος, πραγματοποιήθηκαν δύο κλασματώσεις με υγρή χρωματογραφία στήλης, ενώ προηγήθηκε εκτενής μελέτη με χρωματογραφία λεπτής στοιβάδας. Κατά τη διάρκεια της μελέτης με TLC, δοκιμάστηκε πληθώρα διαλυτών, μειγμάτων έκλουσης και αντιδραστηρίων εμφάνισης. Το αρχικό άπολο κλάσμα, που υποβλήθηκε στην πρώτη κλασμάτωση, έφερε πολύ μεγάλο αριθμό ενώσεων και βρισκόταν σε περιορισμένη ποσότητα. Το τελικό κλάσμα προς μελέτη, έφερε ακόμα μεγάλο αριθμό ενώσεων, γεγονός που αποτέλεσε ένδειξη της υψηλής χημειοποικιλότητας που έχει το είδος. Ταυτόχρονα, η ιδιαίτερα περιορισμένη διαθέσιμη ποσότητα φυτικού υλικού δεν επέτρεψε την απομόνωση καθαρής ένωσης. Προκειμένου να απλοποιηθεί περαιτέρω, ώστε να γίνει εφικτός ο χαρακτηρισμός των ενώσεών του, το τελικό κλάσμα υποβλήθηκε εκ νέου σε κλασμάτωση. Στη συνέχεια, αναπτύχθηκε για τα τελικά υποκλάσματα αυτού, μέθοδος UHPLC-DAD-ESI/MS ανάλυσης, ώστε να δοθεί η δυνατότητα άντλησης όσο το δυνατόν περισσότερων ποιοτικών-δομικών πληροφοριών για τις ενώσεις τους, με τη συνδρομή υπολογιστικά προβλεπόμενων, θεωρητικών φασμάτων μαζών. Τέλος, ελέγχθηκε η ικανότητα αναστολής της ακετυλοχολινεστεράσης από τα τελικά κλάσματα, με μια παραλλαγή της μεθόδου Ellman.
Η χρωματογραφική ανάλυση έδειξε ότι τα τελικά κλάσματα περιείχαν συνολικά 30 διαφορετικές κορυφές, από τις οποίες μελετήθηκαν οι κυριότερες 23. Οι πιθανές ενώσεις που μπόρεσαν να αποδοθούν από τη σχετική βιβλιογραφία, ήταν στην πλειοψηφία τους διτερπενοειδή, δύο γλυκοζίτες φλαβονοειδών και μία κουμαρίνη. Τέλος, όλα τα τελικά κλάσματα επέδειξαν μέτρια προς χαμηλή ικανότητα αναστολής της ακετυλοχολινεστρεάσης, με εξαίρεση ένα από αυτά, το οποίο είχε μέτρια μεν, αλλά σημαντικά μεγαλύτερη ικανότητα αναστολής. Το γεγονός αυτό θα μπορούσε να οφείλεται στο αξιοσημείωτο εύρημα σε αυτό, μιας άγνωστης ένωσης που θα μπορούσε να αφορά ένα αλκαλοειδές διτερπένιο. |
| author2 |
Biskinis, Antonios |
| author_facet |
Biskinis, Antonios Μπισκίνης, Αντώνιος |
| author |
Μπισκίνης, Αντώνιος |
| author_sort |
Μπισκίνης, Αντώνιος |
| title |
Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden |
| title_short |
Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden |
| title_full |
Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden |
| title_fullStr |
Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden |
| title_full_unstemmed |
Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden |
| title_sort |
απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (boiss. & heldr.) baden |
| publishDate |
2021 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/15145 |
| work_keys_str_mv |
AT mpiskinēsantōnios apomonōsēkaicharaktērismossystatikōntouekchylismatosoxikouaithylesteratoueidoussideritisclandestinasubsppeloponnesiacaboissheldrbaden AT mpiskinēsantōnios isolationandcharacterizationofcompoundsderivedfromtheethylacetateextractofthespeciessideritisclandestinasubsppeloponnesiacaboissheldrbaden |
| _version_ |
1771297164237996032 |
| spelling |
nemertes-10889-151452022-09-05T06:57:16Z Απομόνωση και χαρακτηρισμός συστατικών του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του είδους Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden Isolation and characterization of compounds derived from the ethyl acetate extract of the species Sideritis clandestina subsp. peloponnesiaca (Boiss. & Heldr.) Baden Μπισκίνης, Αντώνιος Biskinis, Antonios Τσάι του βουνού Υγρή χρωματογραφία στήλης Φυσικά προϊόντα Διτερπένια Αντιχολινεστερασική δράση Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, Mountain tea Column chromatography UHPLC-DAD-ESI/MS Natural products Diterpenes Anticholinesterase activity Αντικείμενο της παρούσας διπλωματικής εργασίας αποτέλεσε το ενδημικό είδος της Πελοποννήσου Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, από το όρος Χελμός. Συγκεκριμένα, μελετήθηκε το πιο άπολο κλάσμα του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα των εναέριων τμημάτων του φυτού και πιο συγκεκριμένα ένα υποκλάσμα αυτού, με στόχο τον χαρακτηρισμό και απομόνωση όσων ενώσεων ήταν δυνατό και την αξιολόγηση των τελικών ενώσεων ή κλασμάτων ως προς την ικανότητά τους να αναστέλλουν το ένζυμο ακετυλοχολινεστεράση, που εμπλέκεται φαρμακολογικά στη νευροδιαβίβαση. Προκειμένου να επιτευχθεί ο παραπάνω στόχος, πραγματοποιήθηκαν δύο κλασματώσεις με υγρή χρωματογραφία στήλης, ενώ προηγήθηκε εκτενής μελέτη με χρωματογραφία λεπτής στοιβάδας. Κατά τη διάρκεια της μελέτης με TLC, δοκιμάστηκε πληθώρα διαλυτών, μειγμάτων έκλουσης και αντιδραστηρίων εμφάνισης. Το αρχικό άπολο κλάσμα, που υποβλήθηκε στην πρώτη κλασμάτωση, έφερε πολύ μεγάλο αριθμό ενώσεων και βρισκόταν σε περιορισμένη ποσότητα. Το τελικό κλάσμα προς μελέτη, έφερε ακόμα μεγάλο αριθμό ενώσεων, γεγονός που αποτέλεσε ένδειξη της υψηλής χημειοποικιλότητας που έχει το είδος. Ταυτόχρονα, η ιδιαίτερα περιορισμένη διαθέσιμη ποσότητα φυτικού υλικού δεν επέτρεψε την απομόνωση καθαρής ένωσης. Προκειμένου να απλοποιηθεί περαιτέρω, ώστε να γίνει εφικτός ο χαρακτηρισμός των ενώσεών του, το τελικό κλάσμα υποβλήθηκε εκ νέου σε κλασμάτωση. Στη συνέχεια, αναπτύχθηκε για τα τελικά υποκλάσματα αυτού, μέθοδος UHPLC-DAD-ESI/MS ανάλυσης, ώστε να δοθεί η δυνατότητα άντλησης όσο το δυνατόν περισσότερων ποιοτικών-δομικών πληροφοριών για τις ενώσεις τους, με τη συνδρομή υπολογιστικά προβλεπόμενων, θεωρητικών φασμάτων μαζών. Τέλος, ελέγχθηκε η ικανότητα αναστολής της ακετυλοχολινεστεράσης από τα τελικά κλάσματα, με μια παραλλαγή της μεθόδου Ellman. Η χρωματογραφική ανάλυση έδειξε ότι τα τελικά κλάσματα περιείχαν συνολικά 30 διαφορετικές κορυφές, από τις οποίες μελετήθηκαν οι κυριότερες 23. Οι πιθανές ενώσεις που μπόρεσαν να αποδοθούν από τη σχετική βιβλιογραφία, ήταν στην πλειοψηφία τους διτερπενοειδή, δύο γλυκοζίτες φλαβονοειδών και μία κουμαρίνη. Τέλος, όλα τα τελικά κλάσματα επέδειξαν μέτρια προς χαμηλή ικανότητα αναστολής της ακετυλοχολινεστρεάσης, με εξαίρεση ένα από αυτά, το οποίο είχε μέτρια μεν, αλλά σημαντικά μεγαλύτερη ικανότητα αναστολής. Το γεγονός αυτό θα μπορούσε να οφείλεται στο αξιοσημείωτο εύρημα σε αυτό, μιας άγνωστης ένωσης που θα μπορούσε να αφορά ένα αλκαλοειδές διτερπένιο. The subject of this dissertation was the endemic species of Peloponnese, Sideritis clandestina ssp. peloponnesiaca, from Mount Helmos. In particular, this study focused on the most non-polar fraction of the ethyl acetate extract of the aerial parts of the plant and more specifically on a subfraction of it, with the aim of characterizing and isolating as many compounds as possible and evaluating their ability to inhibit acetylcholinesterase, which is involved in neurotransmission. To achieve the above objective, two fractionations were performed by column chromatography, after an extensive study by thin layer chromatography. During the TLC study, a variety of solvents, eluents and TLC-stains were tested. The initial non-polar fraction was in a limited quantity but was subjected to the first fractionation, and the results showed that it comprised a very large number of compounds. Its final fraction still contained many compounds, which is an indication of the high chemovariability of the species. At the same time, the very limited amount of plant material available did not allow the isolation of any pure compound. In order to make the characterization of its compounds feasible, the final fraction was re-fractionated. Subsequently, a UHPLC-DAD-ESI / MS analysis method was developed for its final subfractions through which qualitative-structural information about their compounds was obtained. In support of this process, computationally predicted, theoretical mass spectra were used. Finally, the ability of the final fractions to inhibit acetylcholinesterase was tested with a modification of the Ellman method. The results from the chromatographic analysis showed that the final fractions contained a total of 30 different peaks, of which the major 23 were further studied. The possible compounds that could be attributed to the peaks, according to the relevant literature, were mostly diterpenoids, two flavonoid glycosides and one coumarin. Regarding their activity, all final fractions showed moderate to low acetylcholinesterase inhibitory capacity, except for one, which had a moderate but significantly higher inhibitory capacity. This could be due to the remarkable finding in it, of an unknown compound that could be related to an alkaloid diterpene. 2021-08-02T11:05:23Z 2021-08-02T11:05:23Z 2021-08-02 http://hdl.handle.net/10889/15145 gr application/pdf |
