Χημική σύνθεση νανοσωμάτων (nanobodies). Μελέτη σύνθεσης νανοσώματος της αδαλιμουμάμπης (adalimumab)

• Κύριος συγγραφέας: Καστανά, Κωνσταντίνα
• Άλλοι συγγραφείς: Kastana, Konstantina
• Γλώσσα: Greek
• Έκδοση: 2022
• Θέματα: Αδαλιμουμάμπη; Νανοσώματα; Θειοεστερική σύνδεση; Adalimumab; Nanobodies; Native chemical ligation

Στην παρούσα Μεταπτυχιακή Διπλωματική Εργασία στόχο αποτελεί η μελέτη σύνθεσης του τμήματος (1-121αμινοξέα) της περιοχής κρυσταλλώσιμου θραύσματος ( περιοχή Fc ) της Αδαλιμουμάμπης (Adalimumab) μέσω της πεπτιδικής χημείας. Η αδαλιμουμάμπη ( adalimumab) που πωλείται με το εμπορικό όνομα Humira αποτελεί ένα πλήρως ανθρώπινο μονοκλωνικό αντίσωμα ανασυνδιασμένης ανοσοσφαιρίνης G1(IgG1). Επειδή δεν διακρίνεται στη δομή και τη λειτουργία από τη φυσική ανθρώπινη IgG1 έχει υψηλή εκλεκτικότητα και συγγένεια έναντι της πρωτεΐνης παράγοντα νέκρωσης όγκων (Tumor Necrosis Factor alpha, TNFα), ο οποίος επάγει φλεγμονώδεις αντιδράσεις και παίζει κεντρικό ρόλο σε φλεγμονώδη αυτοάνοσα νοσήματα. Η αδαλιμουμάμπη προσδένεται ειδικά στον ΤNF, τροποποιεί τις βιολογικές ανταποκρίσεις που επάγει και εξουδετερώνει την λειτουργία του, παρεμποδίζοντας την αλληλεπίδραση του με τους υποδοχείς της κυτταρικής μεμβράνης. Το εν λόγω πεπτίδιο ανήκει στην κατηγορία των νανοσωμάτων (nanobodies) δηλαδή θεραπευτικών πρωτεϊνών που βασίζονται σε θραύσματα αντισώματος μονής περιοχής που περιέχουν δομικές και λειτουργικές ιδιότητες μόνο της βαριάς αλυσίδας η οποία περιέχει δυο σταθερές και μια μοναδική μεταβλητή περιοχή με πλήρη ικανότητα δέσμευσης του αντιγόνου. Θα πραγματοποιηθούν δυο προσεγγίσεις σύνθεσης με Fmoc/tBu μεθοδολογία πάνω στη 2-χλωροτρίτυλο- χλωρίδιο ρητίνη (CTC) συνδυάζοντας την μέθοδο της τμηματικής συμπύκνωσης σε στερεή φάση καθώς και αυτήν της step by step, έχοντας η μια από αυτές απώτερο σκοπό την προσπάθεια σύνθεσης ολόκληρου του τμήματος μέσω της Φυσικής Χημικής Σύνδεσης (Native Chemical Ligation). Κατά την διεξαγωγή των δυο προσεγγίσεων παρουσιάστηκαν πολλές δυσκολίες κατά την σύνθεση και ανάλυση των επιμέρους τμημάτων και για τον λόγο αυτό έλαβαν χώρα ποικίλες μέθοδοι σύνθεσης και σχεδιασμοί αναλύσεων. Ο έλεγχος της πορείας της σύνθεσης πραγματοποιείται μέσω της υγρής χρωματογραφίας υψηλής απόδοσης ( HPLC) ενώ η ταυτοποίηση μέσω της φασματομετρίας μάζας ιονισμού ηλεκτροψεκασμού (ESI-MS).