Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib)
Η χειρουργική επέμβαση, η ακτινοθεραπεία και η χημειοθεραπεία με τεμοζολομίδη είναι η πρώτη γραμμή της θεραπείας του γλοιώματος . Το κύριο πρόβλημα με τη χημειοθεραπεία είναι η αδυναμία παροχής της σωστής ποσότητας φαρμάκου απευθείας στα καρκινικά κύτταρα. Αυτό οδηγή σε χαμηλή συγκέντρωση του φαρμάκ...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2022
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/16485 |
| id |
nemertes-10889-16485 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Καρκίνος του γλοιώματος Στοχευμένη χημειοθεραπείας Τριμοριακής ένωσης (S1ISR1) Υγρής χρωματογραφίας–δίδυμης φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS) Πλάσμα ποντικού Επικύρωση της μεθόδου Glioma cancer Temozolomide therapy |
| spellingShingle |
Καρκίνος του γλοιώματος Στοχευμένη χημειοθεραπείας Τριμοριακής ένωσης (S1ISR1) Υγρής χρωματογραφίας–δίδυμης φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS) Πλάσμα ποντικού Επικύρωση της μεθόδου Glioma cancer Temozolomide therapy Ελ Μουμπάρακ, Μωχάμεντ Άχμεντ Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| description |
Η χειρουργική επέμβαση, η ακτινοθεραπεία και η χημειοθεραπεία με τεμοζολομίδη είναι η πρώτη γραμμή της θεραπείας του γλοιώματος . Το κύριο πρόβλημα με τη χημειοθεραπεία είναι η αδυναμία παροχής της σωστής ποσότητας φαρμάκου απευθείας στα καρκινικά κύτταρα. Αυτό οδηγή σε χαμηλή συγκέντρωση του φαρμάκου, και μπορεί να προκαλέσει σοβαρές παρενέργειες λόγω της έλλειψης εξειδίκευσης. Στοχευμένες τεχνικές χημειοθεραπείας και παράδοσης φαρμάκων εμφανίζονται ως μια ισχυρή μέθοδος για την αποφυγή τέτοιων προβλημάτων. Αυτό θα επιτρέψει τον επιλεκτικό και αποτελεσματικό εντοπισμό φαρμάκων σε προκαθορισμένους στόχους (π.χ. υπερεκφρασμένους υποδοχείς στον καρκίνο), μεγιστοποιώντας έτσι τον θεραπευτικό δείκτη και μειώνοντας την τοξικότητα. Ακολουθούμενη την ιδέα της στοχευμένη χημειοθεραπείας μία τριμοριακής ένωσης (S1ISR1) σχεζιάστηκε και συντέθηκε αποτελούμενη από το κυτταροτοξικό παράγοντα (τροποποιημένου μορίου sunitinib), το πεπτίδιο οδηγό RGDR (στοχεύει ιντεγκρίνες) και τον πεπτιδικό φορέα iCPP (υπεύθυνος για την ενδοκυττάρια μεταφορά). Για την αξιολόγηση του φαρμακοκινητικού προφίλ και της σταθερότητας του καινοτόμου συνθετικού μορίου (S1ISR1), του τροποποιημένου sunitinib καθώς και του εμπορικά διαθέσιμου sunitinib σε δείγματα πλάσματος ποντικού ήταν απαραίτητη η ανάπτυξη αναλυτικών μεθοδολογιών. Η τεχνική που επιλέχθηκε ήταν αυτή της υγρής χρωματογραφίας–δίδυμης φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS). Οι μέθοδοι που αναπτύχθηκαν in house για τον προσδιορισμό των αναλτών ήταν απλοί, γρήγοροι, ευαίσθητοι και επικυρώθηκαν βάσει επίσημων οδηγιών του FDA και του EMEA. Η γραμμικότητα βρέθηκε σε εύρος συγκεντρώσεων με συντελεστή προσδιορισμού ≥ 0.999, ενώ τα όρια ποσοτικού προσδιορισμού ήταν αρκετά χαμηλά για την ανίχνευση των αναλυτών σε όλα τα πειράματα. Τόσο του συντελεστή διακύμανσης (Coefcient of Variation (CV)) όσο και του σχετικού σφάλματος (Relative error (RE)) στην ανάλυση των δειγμάτων του πλάσματος ήταν εντός του αποδεκτού εύρους που απεικονίζει την υψηλή ακρίβεια και την πιστότητα των μεθοδών. Επίσης η απλή μέθοδος εκχύλισης με καθίζηση των πρωτεΐνών έδωσε ποσοτικοποίσιμη και αναπαραγώγιμη ανάκτηση στο πλάσμα ποντικού ≥90%. Οι αναπτύχθεισες μεθόδους χρησιμοποιήθηκαν επιτυχώς στην μελέτη της πρωτεολυτικής σταθερότητας ex νίνο και στις in vivo φαρμακοκινητικές μελές σε ποντίκια. |
| author2 |
El Mubarak, Mohamed Ahmed |
| author_facet |
El Mubarak, Mohamed Ahmed Ελ Μουμπάρακ, Μωχάμεντ Άχμεντ |
| author |
Ελ Μουμπάρακ, Μωχάμεντ Άχμεντ |
| author_sort |
Ελ Μουμπάρακ, Μωχάμεντ Άχμεντ |
| title |
Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| title_short |
Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| title_full |
Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| title_fullStr |
Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| title_full_unstemmed |
Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| title_sort |
ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας lc-ms/ms και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) |
| publishDate |
2022 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/16485 |
| work_keys_str_mv |
AT elmoumparakmōchamentachment anaptyxēepikyrōmenēsanalytikēsmethodologiaslcmsmskaiinvivopharmakokinētikēmeletēneouparagōgoutēssounitinimpēssunitinib AT elmoumparakmōchamentachment developmentofavalidatedanalyticalmethodologylcmsmsandinvivopharmacokineticstudyofanewsunitinibanaloguesunitinib |
| _version_ |
1771297151039569920 |
| spelling |
nemertes-10889-164852022-09-05T05:39:05Z Ανάπτυξη επικυρωμένης αναλυτικής μεθοδολογίας LC-MS/MS και in vivo φαρμακοκινητική μελέτη νέου παραγώγου της σουνιτινίμπης (sunitinib) Development of a validated analytical methodology LC-MS/MS and in vivo pharmacokinetic study of a new sunitinib analogue (sunitinib) Ελ Μουμπάρακ, Μωχάμεντ Άχμεντ El Mubarak, Mohamed Ahmed Καρκίνος του γλοιώματος Στοχευμένη χημειοθεραπείας Τριμοριακής ένωσης (S1ISR1) Υγρής χρωματογραφίας–δίδυμης φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS) Πλάσμα ποντικού Επικύρωση της μεθόδου Glioma cancer Temozolomide therapy Η χειρουργική επέμβαση, η ακτινοθεραπεία και η χημειοθεραπεία με τεμοζολομίδη είναι η πρώτη γραμμή της θεραπείας του γλοιώματος . Το κύριο πρόβλημα με τη χημειοθεραπεία είναι η αδυναμία παροχής της σωστής ποσότητας φαρμάκου απευθείας στα καρκινικά κύτταρα. Αυτό οδηγή σε χαμηλή συγκέντρωση του φαρμάκου, και μπορεί να προκαλέσει σοβαρές παρενέργειες λόγω της έλλειψης εξειδίκευσης. Στοχευμένες τεχνικές χημειοθεραπείας και παράδοσης φαρμάκων εμφανίζονται ως μια ισχυρή μέθοδος για την αποφυγή τέτοιων προβλημάτων. Αυτό θα επιτρέψει τον επιλεκτικό και αποτελεσματικό εντοπισμό φαρμάκων σε προκαθορισμένους στόχους (π.χ. υπερεκφρασμένους υποδοχείς στον καρκίνο), μεγιστοποιώντας έτσι τον θεραπευτικό δείκτη και μειώνοντας την τοξικότητα. Ακολουθούμενη την ιδέα της στοχευμένη χημειοθεραπείας μία τριμοριακής ένωσης (S1ISR1) σχεζιάστηκε και συντέθηκε αποτελούμενη από το κυτταροτοξικό παράγοντα (τροποποιημένου μορίου sunitinib), το πεπτίδιο οδηγό RGDR (στοχεύει ιντεγκρίνες) και τον πεπτιδικό φορέα iCPP (υπεύθυνος για την ενδοκυττάρια μεταφορά). Για την αξιολόγηση του φαρμακοκινητικού προφίλ και της σταθερότητας του καινοτόμου συνθετικού μορίου (S1ISR1), του τροποποιημένου sunitinib καθώς και του εμπορικά διαθέσιμου sunitinib σε δείγματα πλάσματος ποντικού ήταν απαραίτητη η ανάπτυξη αναλυτικών μεθοδολογιών. Η τεχνική που επιλέχθηκε ήταν αυτή της υγρής χρωματογραφίας–δίδυμης φασματομετρίας μάζας (LC-MS/MS). Οι μέθοδοι που αναπτύχθηκαν in house για τον προσδιορισμό των αναλτών ήταν απλοί, γρήγοροι, ευαίσθητοι και επικυρώθηκαν βάσει επίσημων οδηγιών του FDA και του EMEA. Η γραμμικότητα βρέθηκε σε εύρος συγκεντρώσεων με συντελεστή προσδιορισμού ≥ 0.999, ενώ τα όρια ποσοτικού προσδιορισμού ήταν αρκετά χαμηλά για την ανίχνευση των αναλυτών σε όλα τα πειράματα. Τόσο του συντελεστή διακύμανσης (Coefcient of Variation (CV)) όσο και του σχετικού σφάλματος (Relative error (RE)) στην ανάλυση των δειγμάτων του πλάσματος ήταν εντός του αποδεκτού εύρους που απεικονίζει την υψηλή ακρίβεια και την πιστότητα των μεθοδών. Επίσης η απλή μέθοδος εκχύλισης με καθίζηση των πρωτεΐνών έδωσε ποσοτικοποίσιμη και αναπαραγώγιμη ανάκτηση στο πλάσμα ποντικού ≥90%. Οι αναπτύχθεισες μεθόδους χρησιμοποιήθηκαν επιτυχώς στην μελέτη της πρωτεολυτικής σταθερότητας ex νίνο και στις in vivo φαρμακοκινητικές μελές σε ποντίκια. Cancer is a major public health problem worldwide and has become the leading cause of death in humans, especially glioma with high morbidity and mortality. Surgery, radiotherapy and chemotherapy with temozolomide are the first line of treatment. The main problem with chemotherapy is the inability to deliver the right amount of medicine directly to the cancer cells. This leads to a low concentration of the drug in local areas of the tumor, and may cause serious side effects due to lack of specialization. Targeted chemotherapy and drug delivery techniques appear to be a powerful method of avoiding such problems. This will allow the selective and effective detection of drugs at predetermined targets (eg overexpressed receptors in cancer), thus maximizing the therapeutic index and reducing the toxicity. Following the idea of targeted chemotherapy, a trimolecular compound (S1ISR1) was conjugated and synthesized consisting of the cytotoxic agent (modified sunitinib molecule), the RGDR leader peptide (targeting integrins) and and the iCPP peptide vector (responsible for intracellular transportatoin). The development of analytical methodologies was necessary to evaluate the pharmacokinetic profile and stability of the innovative synthetic molecule (S1ISR1), the sunitinib modified as well as the commercially available sunitinib in mouse plasma samples. The technique chosen for the study was liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS/MS). Tow methods developed in house for the determination of analytes were simple, fast, sensitive and validated according to official instructions of the FDA and EMEA guidelines. The linearity was found in a range of concentrations with a coefficient of determination of ≥ 0.999, while the limits of quantification were low enough to detect analytes in all experiments. Both the Coefcient of Variation (CV) and Relative error (RE) in the analysis of plasma samples were within the acceptable range reflecting the high accuracy and fidelity of the methods.. Also the simple extraction method by protein precipitation gave quantitative and reproducible recovery in mouse plasma ≥90%. The above methods have been used successfully to the ex vivo proteolytic stability and in vivo pharmacokinetic study in mice. 2022-07-12T10:35:23Z 2022-07-12T10:35:23Z 2021-06-30 http://hdl.handle.net/10889/16485 gr application/pdf |
