Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους
Σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας, σημαντικές επιδημίες και εξάρσεις της ηπατίτιδας Ε έχουν καταγραφεί τα τελευταία χρόνια, με 20 εκατομμύρια λοιμώξεις ετησίως. Η μόλυνση με τον ιό της Ηπατίτιδας Ε είναι η πιο κοινή αιτία εμφάνισης οξείας μορφής φλεγμονής του ήπατος σε ολόκληρο τον κόσμο. Η...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2022
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | https://hdl.handle.net/10889/23671 |
| id |
nemertes-10889-23671 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Ηπατίτιδα Ε Οξεία ηπατίτιδα Μεθυλομεταφοράση Ηepatitis E Αcute liver inflammation Μethyltransferase |
| spellingShingle |
Ηπατίτιδα Ε Οξεία ηπατίτιδα Μεθυλομεταφοράση Ηepatitis E Αcute liver inflammation Μethyltransferase Καπερώνη, Κωνσταντίνα-Γεωργία Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| description |
Σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας, σημαντικές επιδημίες και εξάρσεις της ηπατίτιδας Ε έχουν καταγραφεί τα τελευταία χρόνια, με 20 εκατομμύρια λοιμώξεις ετησίως. Η μόλυνση με τον ιό της Ηπατίτιδας Ε είναι η πιο κοινή αιτία εμφάνισης οξείας μορφής φλεγμονής του ήπατος σε ολόκληρο τον κόσμο. Η οξεία ηπατίτιδα μπορεί να εξελιχθεί σε χρόνια ηπατίτιδα, κίρρωση και ηπατική ανεπάρκεια. Η μετάδοση του ιού στις αναπτυσσόμενες χώρες γίνεται μέσω της κοπρανοστοματικής οδού λόγω των κακών συνθηκών υγιεινής ενώ στις αναπτυγμένες χώρες ο ιός μεταδίδεται κυρίως μέσω της τροφής λόγω της κατανάλωσης άψητου κρέατος από μολυσμένα ζώα. Απουσία, εγκεκριμένης θεραπευτικής φαρμακευτικής αγωγής, η θεραπεία της μόλυνσης για τον ιό HEV περιλαμβάνει την εφαρμογή ριμπαβιρίνης, με σκοπό την αναστολή της δράσης της εξαρτώμενης από το RNA, RNA πολυμεράσης, με πολλά υποσχόμενα αποτελέσματα σε ασθενείς με οξεία και με χρόνια ηπατίτιδα Ε καθώς και μυκοφαινολικό οξύ με ευρεία αντιιϊκή δράση, για την αναστολή της
σύνθεσης της γουανίνης. Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία πραγματοποιήθηκε η διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε ως προς τη δομική ακεραιότητά τους και την λειτουργικότητά τους. Οι μεθυλομεταφοράσες είναι ένζυμα, τα οποία καταλύουν τη μεταφορά μιας μεθυλικής ομάδας από το SAM σε μια μεγάλη ποικιλία υποστρωμάτων όπως DNA, RNA, πρωτεΐνες, μικρά μόρια και λιπίδια. Ο τομέας της μεθυλομεταφοράσης του ιού HEV περιλαμβάνει μια περιοχή από 60 έως 240 αμινοξικά κατάλοιπα, εδράζεται στο αμινοτελικό άκρο του ανοιχτού πλαισίου ανάγνωσης 1 του ιού και ανήκει εξελικτικά και δομικά στην υπερ-οικογένεια «Rossmann Fold Methylotransferase». Οι μεθυλομεταφοράσες αυτής της κατηγορίας υιοθετούν στον χώρο την πτυχή Rossmann, η οποία χαρακτηρίζεται από μια αρχιτεκτονική «β-α-β» με παράλληλους β κλώνους και παρεμβαλλόμενες α έλικες. Καταλύουν τον σχηματισμό του καλύμματος του RNA, το οποίο είναι ζωτικής σημασίας για τη μολυσματικότητά των ιών. Η μεθυλομεταφοράση του ιού HEV είναι ένας ισχυρός ανταγωνιστής των ιντερφερονών τύπου Ι, οι οποίες είναι η πρώτη γραμμή άμυνας του ξενιστή κατά της ιογενούς λοίμωξης.
Παρατίθενται πειράματα εύρεσης κατάλληλων συνθηκών έκφρασης, παρασκευής και απομόνωσης πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης. Πιο συγκεκριμένα διερευνώνται ποικίλλου μεγέθους ανασυνδυασμένα πολυπεπτίδια της μεθυλομεταφοράσης του ιού της Ηπατίτιδας Ε ως προς την διαλυτότητα και τη σταθερότητα τους σε διάφορες συνθήκες και σε πληθώρα διαλυμάτων, για την επίτευξη NMR δομικής μελέτης και την αποσαφήνιση των λειτουργικών ιδιοτήτων της μεθυλομεταφοράση |
| author2 |
Kaperoni Konstantina-Georgia |
| author_facet |
Kaperoni Konstantina-Georgia Καπερώνη, Κωνσταντίνα-Γεωργία |
| author |
Καπερώνη, Κωνσταντίνα-Γεωργία |
| author_sort |
Καπερώνη, Κωνσταντίνα-Γεωργία |
| title |
Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| title_short |
Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| title_full |
Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| title_fullStr |
Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| title_full_unstemmed |
Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| title_sort |
διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους |
| publishDate |
2022 |
| url |
https://hdl.handle.net/10889/23671 |
| work_keys_str_mv |
AT kaperōnēkōnstantinageōrgia diereunēsēpolypeptidiōntēsepikrateiastēsmethylometaphorasēstouioutēsēpatitidaseōsprostēnsicdomikēakeraiotētatouskaitēnsicleitourgikotētatous AT kaperōnēkōnstantinageōrgia investigationofpolypeptidesofhepatitisevirusmethyltransferasedomainforstructuralintegrityandfunctionality |
| _version_ |
1771297165373603840 |
| spelling |
nemertes-10889-236712022-11-04T04:34:41Z Διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε, ως προς την [sic] δομική ακεραιότητά τους και την [sic] λειτουργικότητά τους Investigation of polypeptides of hepatitis E virus methyltransferase domain for structural integrity and functionality Καπερώνη, Κωνσταντίνα-Γεωργία Kaperoni Konstantina-Georgia Ηπατίτιδα Ε Οξεία ηπατίτιδα Μεθυλομεταφοράση Ηepatitis E Αcute liver inflammation Μethyltransferase Σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας, σημαντικές επιδημίες και εξάρσεις της ηπατίτιδας Ε έχουν καταγραφεί τα τελευταία χρόνια, με 20 εκατομμύρια λοιμώξεις ετησίως. Η μόλυνση με τον ιό της Ηπατίτιδας Ε είναι η πιο κοινή αιτία εμφάνισης οξείας μορφής φλεγμονής του ήπατος σε ολόκληρο τον κόσμο. Η οξεία ηπατίτιδα μπορεί να εξελιχθεί σε χρόνια ηπατίτιδα, κίρρωση και ηπατική ανεπάρκεια. Η μετάδοση του ιού στις αναπτυσσόμενες χώρες γίνεται μέσω της κοπρανοστοματικής οδού λόγω των κακών συνθηκών υγιεινής ενώ στις αναπτυγμένες χώρες ο ιός μεταδίδεται κυρίως μέσω της τροφής λόγω της κατανάλωσης άψητου κρέατος από μολυσμένα ζώα. Απουσία, εγκεκριμένης θεραπευτικής φαρμακευτικής αγωγής, η θεραπεία της μόλυνσης για τον ιό HEV περιλαμβάνει την εφαρμογή ριμπαβιρίνης, με σκοπό την αναστολή της δράσης της εξαρτώμενης από το RNA, RNA πολυμεράσης, με πολλά υποσχόμενα αποτελέσματα σε ασθενείς με οξεία και με χρόνια ηπατίτιδα Ε καθώς και μυκοφαινολικό οξύ με ευρεία αντιιϊκή δράση, για την αναστολή της σύνθεσης της γουανίνης. Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία πραγματοποιήθηκε η διερεύνηση πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης του ιού της ηπατίτιδας Ε ως προς τη δομική ακεραιότητά τους και την λειτουργικότητά τους. Οι μεθυλομεταφοράσες είναι ένζυμα, τα οποία καταλύουν τη μεταφορά μιας μεθυλικής ομάδας από το SAM σε μια μεγάλη ποικιλία υποστρωμάτων όπως DNA, RNA, πρωτεΐνες, μικρά μόρια και λιπίδια. Ο τομέας της μεθυλομεταφοράσης του ιού HEV περιλαμβάνει μια περιοχή από 60 έως 240 αμινοξικά κατάλοιπα, εδράζεται στο αμινοτελικό άκρο του ανοιχτού πλαισίου ανάγνωσης 1 του ιού και ανήκει εξελικτικά και δομικά στην υπερ-οικογένεια «Rossmann Fold Methylotransferase». Οι μεθυλομεταφοράσες αυτής της κατηγορίας υιοθετούν στον χώρο την πτυχή Rossmann, η οποία χαρακτηρίζεται από μια αρχιτεκτονική «β-α-β» με παράλληλους β κλώνους και παρεμβαλλόμενες α έλικες. Καταλύουν τον σχηματισμό του καλύμματος του RNA, το οποίο είναι ζωτικής σημασίας για τη μολυσματικότητά των ιών. Η μεθυλομεταφοράση του ιού HEV είναι ένας ισχυρός ανταγωνιστής των ιντερφερονών τύπου Ι, οι οποίες είναι η πρώτη γραμμή άμυνας του ξενιστή κατά της ιογενούς λοίμωξης. Παρατίθενται πειράματα εύρεσης κατάλληλων συνθηκών έκφρασης, παρασκευής και απομόνωσης πολυπεπτιδίων της επικράτειας της μεθυλομεταφοράσης. Πιο συγκεκριμένα διερευνώνται ποικίλλου μεγέθους ανασυνδυασμένα πολυπεπτίδια της μεθυλομεταφοράσης του ιού της Ηπατίτιδας Ε ως προς την διαλυτότητα και τη σταθερότητα τους σε διάφορες συνθήκες και σε πληθώρα διαλυμάτων, για την επίτευξη NMR δομικής μελέτης και την αποσαφήνιση των λειτουργικών ιδιοτήτων της μεθυλομεταφοράση According to the World Health Organization, significant epidemics and outbreaks of hepatitis E have been recorded in recent years, with 20 million infections annually. Hepatitis E virus infection is the most common cause of acute liver inflammation worldwide. Acute hepatitis can progress to chronic hepatitis, cirrhosis and liver failure. Transmission of the virus in developing countries occurs through the fecal-oral route due to poor hygiene conditions, while in developed countries the virus is transmitted mainly through food due to the consumption of uncooked meat from infected animals. In the absence of approved therapeutic medication, the treatment of HEV infection includes the application of ribavirin, with the aim of inhibiting the action of RNA-dependent RNA polymerase, with promising results in patients with acute and chronic hepatitis E as well as mycophenolic acid with broad anti-viral activity, to inhibit the synthesis of guanine. In this master's thesis, polypeptides of the hepatitis E virus methyltransferase domain were investigated for their structural integrity and functionality. Methyltransferases are enzymes, which catalyze the transfer of a methyl group from SAM to a wide variety of substrates such as DNA, RNA, proteins, small molecules and lipids. The HEV methyltransferase domain comprises a region of 60 to 240 amino acid residues, is located at the amino terminus of the viral open reading frame 1, and belongs evolutionarily and structurally to the "Rossmann Fold Methylotransferase" superfamily. Methyltransferases of this class adopt in space the Rossmann fold, which is characterized by a "β-α-β" architecture with parallel β strands and intercalated α helices. They catalyze the formation of the RNA cap, which is crucial for viral infectivity. HEV methyltransferase is a potent antagonist of type I interferons, which are the first line of host defense against viral infection. Experiments to find suitable conditions for expression, preparation and isolation of methyltransferase domain polypeptides are listed. More specifically, recombinant hepatitis E virus methyltransferase polypeptides of various sizes are investigated for their solubility and stability under various conditions and in a variety of solutions, to achieve NMR structural study and elucidate the functional properties of the methyltransferase. 2022-11-03T14:24:35Z 2022-11-03T14:24:35Z 2022-09-19 https://hdl.handle.net/10889/23671 el application/pdf |
