| Περίληψη: | Το Ε2 ένζυμο UbcH13 δρα σε σημαντικά σηματοδοτικά μονοπάτια, όπως είναι το μονοπάτι της ουβικιτινίωσης. Το UbcH13 συνεργάζεται με τον Mms2 δημιουργώντας αλυσίδες Ub μέσω της Lys63, η σύνδεση των μορίων ουβικιτίνης μέσω της Κ63 πραγματοποιείται σε υποστρώματα τα οποία εμπλέκονται στην επιδιόρθωση του DNA .
Η Arkadia είναι μια πρωτεΐνη η οποία δρα μέσω του RING-Η2 τομέα, τον οποίο φέρει στο C-τελικό της άκρο και της επιτρέπει να λειτουργεί ως Ε3 λιγάση ουβικιτίνης. Η Arkadia συμμετέχει στο TGF-β μονοπάτι, σε συνεργασία με το Ε2 UbcH5b με σκοπό την αποικοδόμηση των αρνητικών ρυθμιστών του μέσω του συστήματος ουβικιτίνης-πρωτεασώματος.
Ένας διαφορετικός ρόλος της πρωτεΐνης Arkadia είναι η συμμετοχή της στο μηχανισμό της επιδιόρθωσης με εκτομή νουκλεοτιδίου (Nucleotide excision repair, NER), o οποίος είναι ένας από τους μηχανισμούς της επιδιόρθωση του DNA. Για αυτή τη λειτουργία η Arkadia αλληλεπιδρά με το σύμπλοκο των UbcH13-Mms2 και δρα ως STUBL (SUMO Targeted Ubiquitin Ligase). Η πρωτεΐνη Arkadia διαθέτει τρία μοτίβα αλληλεπίδρασης με τις SUMO πρωτεΐνες, μέσω των οποίων αναγνωρίζει τις σουμοϋλιωμένες πρωτεΐνες τις οποίες ουβικιτινιώνει.
Στην παρούσα μεταπτυχιακή εργασία πραγματοποιήθηκαν η έκφραση και η απομόνωση των UbcH13 και Mms2 Ε2 ενζύμων. Ειδικότερα, μελετήθηκε η αλληλεπίδραση του UbcH13 με τα “RING” και “LONG” πολυπεπτίδια της πρωτεΐνης Arkadia, με τη χρήση της φασματοσκοπίας NMR. Η λειτουργικότητα των “RING” και “LONG” πολυπεπτιδίων της Arkadia με το UbcH13 και με το σύμπλοκο των UbcH13-Mms2 μελετήθηκε μέσω πειραμάτων ουβικιτινίωσης.
|
|---|
