| Περίληψη: | Η παρεγκεφαλίδα των πτηνών, μια μορφολογικά μοναδική δομή του
εγκεφάλου, αποτελείται από 10 λοβούς (μερικοί από τους οποίους φέρουν
δευτερογενείς υποδιαιρέσεις), οι οποίοι σχηματίζονται κατά τα ενδιάμεσα
εμβρυϊκά αναπτυξιακά στάδια. Ο πολλαπλασιασμός και η μετανάστευση των
κυττάρων της εξωτερικής κοκκώδους στιβάδας είναι το κύριο γεγονός κατά
την διαδικασία ανάπτυξης των παρεγκεφαλιδικών λοβών. Σκοπός της
παρούσας μελέτης είναι η διερεύνηση του μηχανισμού σχηματισμού των
λοβών στην αναπτυσσόμενη παρεγκεφαλίδα. Για τον προσδιορισμό του
ρυθμού του πολλαπλασιασμού των πρόγονων κοκκωδών κύτταρων,
εφαρμόσθηκε η ανοσοϊστοχημική μέθοδος της 5-βρωμο-2-δεοξυουριδίνης
(BrdU). Η BrdU, που ενσωματώνεται στο DNA κατά την S-φάσης του
κυτταρικού κύκλου, ενέθηκε in ovo (100μg/gr βάρους αυγού σε φυσιολογικό
ορό) στις εμβρυικές μέρες E10, E13, E15 και E17, και μετά από
διαφορετικούς χρόνους επιβίωσης, τα έμβρυα θυσιάστηκαν (1, 2 και 3 ώρες
μετά την ένεση), μονιμοποιήθηκαν με ενδοκάρδια έγχυση, και αφαιρέθηκε ο
εγκέφαλος, έγινε κρυο-προστασία, μετά –μονιμοποίηση και φύλαξη του
εγκεφάλου στους -80°C. Την E10 ημέρα, παρατηρήθηκε πλήρως
ανεπτυγμένη πρωτογενής σχισμή, ενώ από την E13 ημέρα, όλοι οι λοβοί της
παρεγκεφαλίδας έχουν σχηματιστεί και μέχρι την E17 μέρα όλες οι
υποδιαιρέσεις τους είναι εμφανείς. Με πειράματα απλής και διπλής
ανοσοϊστοχημείας, σε διατομές 20μm, προσδιορίσθηκε ο αριθμός των
μιτωτικά ενεργών κυττάρων στην S-φάση (BrdU σήμανση), ο αριθμός των
αποπτωτικών κυττάρων (σήμανση κασπάσης 3). Έγινε χαρτογράφηση των
προτύπων πολλαπλασιασμού και απόπτωσης (με τη χρήση camera lucida)
και υπολογίστηκε σε συγκεκριμένους λοβούς ο αριθμός των προγονικών
κοκκωδών κυττάρων σε διαφορετικούς χρόνους επιβίωσης. Μόνο μικρός
αριθμός αποπτωτικών κυττάρων παρατηρήθηκε στη μελλοντική εσωτερική
κοκκώδη στιβάδα, τον τελικό προορισμό των κυττάρων της εξωτερικής
κοκκώδους στιβάδας, και συνεπώς η απόπτωση δεν παίζει καθοριστικό ρόλο
στον σχηματισμό των λοβών.
|
|---|
