| Περίληψη: | Οι μεταγραφικοί παράγοντες COUP-TF (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter
Transcription Factor) ανήκουν στην υπεροικογένεια των υποδοχέων
στεροειδών/ θυρεοειδών ορμονών και θεωρούνται “ορφανοί”, αφού μέχρι
στιγμής δεν έχει βρεθεί το υπεύθυνο πρόσδεμα για την ενεργοποίηση τους.
Πειραματικές διαδικασίες στο εργαστήριο μας έχουν δείξει ότι στο πρωτογενές
μετάγραφο των COUP-TFs συμβαίνει εναλλακτικό μάτισμα που έχει ως
αποτέλεσμα την παραγωγή δύο mRNAs που κωδικοποιούν δύο πρωτεΐνες οι
οποίες διαφέρουν ως προς το μέγεθος λόγω της εισαγωγής 21 επίπρόσθετων
αμινοξέων στην καρβοξυτελική περιοχή (Carboxy Terminal Extension) της
περιοχής πρόσδεσης στο DNA (DBD). Πειράματα EMSA με τη χρήση in vitro
μεταφρασμένων πρωτεϊνών, αποκάλυψαν ότι η μεγάλη πρωτεΐνη δεν μπορεί να
προσδεθεί σε κανένα COUP-TF στοιχείο απόκρισης. Επίσης παρατηρήθηκε ότι
παρουσία της μεγάλης πρωτεΐνης, η ικανότητα της μικρής πρωτεΐνης να
προσδένεται στο DNA μειώνεται με ανταγωνιστικό τρόπο, οδηγώντας στο
συμπέρασμα ότι το ετεροδιμερές πρωτεϊνικό σύμπλοκο δεν μπορεί να προσδεθεί
στο DNA. Σκοπός μας είναι να ερευνήσουμε το ρόλο της ένθεσης των 21
αμινοξέων στην μεγάλη πρωτεΐνη, ως προς την ικανότητα πρόσδεσης της στο
DNA. Στον αχινό Paracentrotus lividus, η αμινοξική ένθεση στην καρβοξυτελική
περιοχή (CTE) της μεγάλης πρωτεΐνης περιέχει δύο προλίνες. Η υπόθεση μας
είναι ότι αυτές οι δύο προλίνες παίζουν σημαντικό ρόλο στην
στερεοδιαμόρφωση της πρωτεΐνης, επηρεάζοντας την ικανότητα πρόσδεσης στο
DNA. Για να ελέγξουμε την υπόθεση αυτή, προκαλέσαμε σημειακές μεταλλάξεις,
μεταλλάσσοντας συγχρόνως τις δύο προλίνες σε αλανίνες αλλά κάθε μία προλίνη
σε αλανίνη μεμονωμένα, καθώς επίσης μελετήσαμε και μια σειρά εσωτερικών
αμινοξικών ελλειμάτων μέσα στην ένθεση των 21 αμινοξέων στην
καρβοξυτελική περιοχή. Το σύνολο των μεταλλάξεων έδειξε ότι οι
μεταλλαγμένες μεγάλες πρωτεΐνες δεν προσδένονται στο DNA καθώς επίσης ότι
οι μεταλλαγμένες μεγάλες πρωτεΐνες ετεροδιμερίζονται πιο αποτελεσματικά με
την μικρή ισομορφή πιθανότατα λόγω επαγόμενης αλλαγής της
στερεοδιαμόρφωσης της μεταλλαγμένης πρωτεΐνης. Επίσης μελετήσαμε την
εξάπλωση του εναλλακτικού ματίσματός στα Δευτεροστόμια, χρησιμοποιώντας
ειδικούς εκφυλισμένους εκκινητές σε πειράματα PCR. Εναλλακτικό μάτισμα των
μεταγράφων COUP-TF παρατηρήθηκε επίσης στους οργανισμούς Sphaerechinus
granularis (Εχινόδερμο) και Saccoglossus kowalevskii (Ημιχορδωτό).
|
|---|
