Λειτουργική μελέτη της διαγονιδιακής μεταφοράς στην υπεζωκοτική κοιλότητα

• Κύριος συγγραφέας: Ηλιοπούλου, Μαριάνθη
• Άλλοι συγγραφείς: Σταθόπουλος, Γεώργιος
• Μορφή: Thesis
• Γλώσσα: Greek
• Έκδοση: 2014
• Θέματα: Διαγονιδιακή μεταφορά; Υπεζωκότας; Κακοήθης υπεζωκοτική συλλογή (ΚΥΣ); Gene transfer; Pleura; Malignant pleural effusion; 616.25

Η κακοήθης υπεζωκοτική συλλογή (ΚΥΣ), προκαλούμενη από μεταστατικά αδενοκαρκινώματα είτε από πρωτοπαθή μεσοθηλιώματα, αποτελεί μείζον κλινικό πρόβλημα καθώς σηματοδοτεί συστηματική νεοπλασματική διασπορά και χαμηλό προσδόκιμο επιβίωσης. Η τρέχουσα αντιμετώπισή της είναι μη αιτιολογική και συχνά αναποτελεσματική. Ενώ τα νεοπλάσματα που προκαλούν ΚΥΣ φέρουν καλά χαρακτηρισμένες μεταλλάξεις και ο υπεζωκότας θεωρείται προνομιακή ανατομική θέση γονιδιακής θεραπείας, οι μέχρι τώρα μελέτες της αποτελεσματικότητας της υπεζωκοτικής διαγονιδιακής μεταφοράς υπήρξαν αποσπασματικές. ΣΚΟΠΟΣ: Σκοπός της παρούσας μελέτης είναι ο χαρακτηρισμός της έκτασης, της αποτελεσματικότητας και της λειτουργικότητας της διαγονιδιακής μεταφοράς τόσο στο φυσιολογικό υπεζωκοτικό μεσοθήλιο, όσο και και στον πάσχοντα υπεζωκότα με πρωτοπαθείς ή μεταστατικούς όγκους. ΥΛΙΚΑ ΚΑΙ ΜΕΘΟΔΟΙ: Υγιείς ποντικοί φυσικού τύπου C57BL/6 και διαγονιδιακοί ποντικοί-ιχνηλάτες mT.mG έλαβαν ενδοϋπεζωκοτικές εγχύσεις 5 x 108 μολυσματικών μονάδων αδενοϊών τύπου 5 (Ad) που κωδικοποιούν τα γονίδια της λουσιφεράσης (Luc), της πράσινης φθορίζουσας πρωτεΐνης (GFP) και της Cre ρεκομπινάσης. Η αποτελεσματικότητα της διαγονιδιακής μεταφοράς μελετήθηκε με απεικόνιση βιοφωταύγειας/βιοφθορισμού, καθώς και με φθορίζουσα μικροσκοπία. Τα πειράματα επαναλήφθηκαν σε ποντικούς με ΚΥΣ, οι οποίες προκλήθηκαν μέσω υπεζωκοτικής έγχυσης 150.000 κυττάρων συγγενικού μεσοθηλιώματος υπεζωκότα (ΑΕ17) και αδενοκαρκινώματος πνεύμονα (LLC). Προκειμένου να μελετηθεί αν οι αδενοϊοί σε ποιο βαθμό μπορούν να διαμολύνουν κύτταρα in vitro , ανθρώπινες και ποντικίσιες κυτταρικές σειρές , φυσιολογικές και καρκινικές , διαμολύνθηκαν με 10ng/μl Ad-luc και Ad-GFP. AΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ: Η θωρακική φωτεινή εκπομπή ποντικών C57BL/6 κορυφώθηκε την πρώτη και υποχώρησε τη δεύτερη εβδομάδα μετά ενδοϋπεζωκοτική έγχυση Ad-Luc . Δύο εβδομάδες μετά από ενδοϋπεζωκοτική χορήγηση Ad-Cre σε ποντικούς mT.mG παρατηρήθηκε διάχυτη εξάλειψη του ερυθρού και εμφάνιση πράσινου φθορίζοντος σήματος σε όλες τις υπεζωκοτικές επιφάνειες, το οποίο εντοπιζόταν κατ’ αποκλειστικότητα στο μεσοθήλιο. Δύο εβδομάδες μετά από έγχυση Ad-Cre σε ποντικούς mT.mG που είχαν αναπτύξει όγκους παρατηρήθηκε πράσινος φθορισμός μαζί με τον κόκκκινο μέσα στους όγκους. Στατιστικώς σημαντική διαμόλυνση παρατηρήθηκε in vitro στα κύτταρα φυσιολογικού μεσοθηλίου, μεσοθηλιώματος ανθρώπου και ποντικού , αδενοκαρκινώματος πνεύμονα και παγκρέατος ποντικού. ΣΥΜΠΕΡΑΣΜΑΤΑ: Η ενδοϋπεζωκοτική έγχυση ανασυνδυασμένων αδενοιών αποτελεί αποτελεσματική μέθοδο διαγονιδιακής μεταφοράς στο φυσιολογικό και παθολογικό υπεζωκοτικό μεσοθήλιο. Ο βαθμός της διαγονιδιακής μεταφοράς επιβεβαιώνεται με τη διαμόλυνση φυσιολογικών και καρκινικών κυτταρικών σειρών in vitro.