Περίληψη: | Σκοπός της συγκεκριμένης ερευνητικής εργασίας ήταν η αποκάλυψη του ρόλου και της θέσης του PlCOUP-TF στο ρυθμιστικό γονιδιακό δίκτυο της νευρογένεσης του αχινού Paracentrotus lividus, αλλά και η διερεύνηση των επιδράσεων του συγκεκριμένου μεταγραφικού παράγοντα στα υπόλοιπα γονίδια που εμπλέκονται στην δημιουργία νευρώνων. Ο PlCOUP-TF είναι ένας μητρικός μεταγραφικός παράγοντας και ορφανός πυρηνικός υποδοχέας που φαίνεται να διαδραματίζει σημαντικό ρόλο στην δημιουργία νευρώνων σε μια ποικιλία οργανισμών. Τα υπό μελέτη γονίδια της νευρογένεσης είναι επίσης μεταγραφικοι παράγοντες με εξελικτικά συντηρημένες επικράτειες. Για τον προαναφερθέντα σκοπό, πραγματοποίηθηκαν πειράματα διπλής φθορίζουσας in situ υβριδοποίησης ώστε να αποκαλυφθούν οι περιοχές συνεντοπίσμου του PlCOUP-TF και των γονιδίων της νευρογένεσης σε ώριμα στάδια της ανάπτυξης. Επίσης, διεξήχθησαν πειράματα καταστολής της μητρικής έκφρασης του PlCOUP-TF με ενέσεις με ΜΑSO σε γονιμοποιημένα ωάρια και έλεγχος της έκφρασης των νευροειδικών γονιδίων στα ενεμένα και στα αντίστοιχα control έμβρυα. Ο έλεγχος της έκφρασης ήταν τόσο ποιοτικός (in situ χρωμογόνος υβριδοποίηση) όσο και ποσοτικός (Q-PCR). Με τα πειράματα αυτά, αποκαλύφθηκε ότι πιθανότατα ο συγκεκριμένος μεταγραφικός παράγοντας λειτουργεί ενεργοποιητικά για τα εν λόγω γονίδια. Συγκεκριμένα, φαίνεται η ύπαρξη κατασταλτικής δράσης του PlCOUP-TF πάνω σε καταστολέα των γονιδίων της νευρογένεσης (double negative gate) στην περιοχή του εμπρόσθιου νευροεξωδέρματος και σε συγκεκριμένες περιοχές της βλεφαριδωτής ζώνης.
|