| Περίληψη: | Για την εργασία αυτή χρησιμοποιούμε ως δείγματα καρκινικά κύτταρα PC3 και DU145, καθώς και πληθυσμούς των ίδιων κυττάρων, οι οποίοι έχουν διαμολυνθεί με ένα πλασμίδιο που μειορρυθμίζει την έκφραση ενός υποδοχέα, του RPTPβ/ζ. Η διαμόλυνση έγινε από τη Ζωή Διαμαντοπούλου (μια προηγούμενη υποψήφια διδάκτορα), ως μέρος της διπλωματικής της εργασίας, και είναι προφανές ότι, κατά την καλλιέργειά τους, πολλαπλασιάζονται πολύ πιο αργά από τα αντίστοιχα φυσιολογικά κύτταρα.
Ο σκοπός αυτής της εργασίας είναι να διερευνήσει εάν αυτό συμβαίνει λόγω μειωμένου ρυθμού εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου ή αυξημένου ρυθμού απόπτωσης, καθώς επίσης και να εξετάσει έμμεσα τις επιπτώσεις της έλλεψης του υποδοχέα, εφόσο αυτό αποτελεί και τη μόνη διαφορά μεταξύ των φυσιολογικών και μετασχηματισμένων κυττάρων.
Με σκοπό να διερευνήσουμε το ρυθμό απόπτωσης των τεσσάρων αυτών πληθυσμών, διενεργήσαμε πειράματα κυτταρομετρίας ροής με Αννεξίνη και ΡΙ, ώστε να υπολογίσουμε των αριθμό των βιώσιμων και νεκρωτικών κυττάρων, καθώς και τον αριθμό των κυττάρων που βρίσκονται σε πρώιμη και προχωρημένη απόπτωση. Επιπλέον, κάναμε πειράματα με ανάλυση κατά Western, με σκοπό να εκτιμήσουμε τα επίπεδα των ενεργοποιημένων κασπασών 8 και 3 στα διάφορα κύτταρα. Προκειμένου να μελετήσουμε την ταχύτητα εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου, διενεργήσαμε πειράματα ανοσοφθορισμού με επώαση με BrdU για 4h και 24h, για να υπολογίσουμε το ποσοστό των κυττάρων που είχαν νεοσυντιθέμενο DNA. Τέλος, χρησιμοποιώντας και πάλι την ανάλυση κατά Western, μελετήσαμε τα επίπεδα της πρωτεΐνης Cdt1, η οποία παίζει σημαντικό ρόλο στην αδειοδότηση της αντιγραφής του DNA.
|
|---|
