In vitro μελέτη της δράσης της imiquimod σε απομονωμένους κυτταρικούς πληθυσμούς περιφερικού αίματος ασθενών με recurrent herpes labialis και υγιείς μάρτυρες

• Κύριος συγγραφέας: Κοσμά, Μαριάνθη
• Άλλοι συγγραφείς: Μουζάκη, Αθανασία
• Μορφή: Thesis
• Γλώσσα: Greek
• Έκδοση: 2016
• Θέματα: Ιμικουϊμόδη; Επιχείλιος έρπης; Ανθρώπινα θηλώματα; Imiquimod; Recurrent herpes labialis; Human papilomavirus; 615.792 4

Η ιμικουϊμόδη είναι μία ιμιδαζοκινολίνη, αγωνιστής του TLR7 με ανοσοτροποποιητική και αντι-ιική δράση. Στην παρούσα εργασία μελετήθηκε η συστηματική ανοσοτροποποιητική δράση που μπορεί να ασκεί η ιμικουϊμόδη σε συγκεκριμένους κυτταρικούς πληθυσμούς λευκών αιμοσφαιρίων σε ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις από επιχείλιο έρπη (recurrent Herpes labialis) και ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων (Human papilomavirus). Αναλυτικότερα καταγράφηκε το προφίλ της γονιδιακής έκφρασης των κυτταροκινών IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, IL-17, TNF-α, TGF-β1, IFN-α ,IFN-γ και του μεταγραφικού παράγοντα FoxP3, σε καθαρούς κυτταρικούς πληθυσμούς CD14+ καθώς και CD3+CD25+ Τ κυττάρων, CD3+CD8+CD25- και CD3+CD4+CD25- Τ κυττάρων. Μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος απομονώθηκαν από ασθενείς και υγιείς δότες. Τα κύτταρα αυτά καλλιεργήθηκαν παρουσία και απουσία ιμικουϊμόδης για 24 ώρες. Στο τέλος της καλλιέργειας, απομονώθηκαν οι πληθυσμοί των CD14+, CD3+CD25+, CD3+CD8+CD25-, CD3+CD4+CD25- T-κυττάρων με μαγνητικά σφαιρίδια. Ακολούθησε απομόνωση ολικού RNA, αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης με αντίστροφη μεταγραφή (RT-PCR ανάλυση), για τον προσδιορισμό των επιπέδων γονιδιακής έκφρασης κυτταροκινών και του μεταγραφικού παράγοντα FoxP3. Η ανάλυση των προϊόντων της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PCR) έγινε με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα αγαρόζης. Από τα αποτελέσματα συμπεραίνουμε ότι η ιμικουϊμόδη διεγείρει την έκφραση των γονιδίων της IL-6, IL-10, και του ΤΝF-α στα μονοκύτταρα των υγιών ατόμων καθώς και στους ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις από επιχείλιο έρπητα (Herpes labialis) και ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων (Human papilomaviruses). Ακόμα επηρέασε σημαντικά την έκφραση της IL-17 στα CD3+CD4+CD25- βοηθητικά Τ-λεμφοκύτταρα του ασθενή που βρισκόταν σε έξαρση. Τα επίπεδα του μεταγραφικού παράγοντα FoxP3 μειώθηκαν στα CD3+CD25+ κύτταρα των υγιών ατόμων και αύξηθηκαν στους ασθενείς μετά από καλλιέργεια με ιμικουϊμόδη. Η ιμικουϊμόδη προκαλεί μία πόλωση προς τις κυτταροκίνες τύπου 1 στα μονοκύτταρα των ασθενων με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις από επιχείλιο έρπητα (Herpes labialis) και από ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων (Human papilomavirouses-HPV) που βρίσκονται σε ύφεση και στους υγιείς, ενώ δεν έχει το ίδιο αποτέλεσμα στον ασθενή με επιχείλιο έρπητα σε έξαρση. Η προσθήκη ιμικουϊμόδης στις καλλιέργειες των κυττάρων οδήγησε σε ένα Th1 προφίλ έκφρασης κυτταροκινών από τα CD3+CD4+CD25- κύτταρα του ασθενή που βρίσκονταν σε έξαρση. Ένας πιθανός μηχανισμός δράσεως της ιμικουϊμόδης στους ασθενείς είναι η ενεργοποίηση του TLR7 που οδηγεί στην ενεργοποίηση του MyD-88 σηματοδοτικού μονοπατιού και στην απελευθέρωση του μεταγραφικού παράγοντα NF-kB από τον καταστολέα του IκB. Έτσι εκκρίνονται φλεγμονώδεις κυτταροκίνες και διεγείρεται η αντι-ιική δραστηριότητα. Τα in vitro ευρήματά μας δεν είναι δυνατόν να αναχθούν στις in vivo συνθήκες, επιτρέπουν όμως τη διατύπωση της υποθέσεως ότι η ιμικουϊμόδη μπορεί να επάγει την φυσική ανοσία καθώς και στοχευμένες αντι-ιικές αντιδράσεις στους ασθενείς με υποτροπιάζουσες λοιμώξεις που βρίσκονται σε ύφεση. Στον ασθενή με επιχείλιο έρπη σε έξαρση επηρεάζει τα βοηθητικά Τ-λεμφοκύτταρα και τα οδηγεί σε μία Th1 απόκριση. Η αξιολόγηση κλινικών και in vitro δεδομένων οδηγεί στο συμπέρασμα ότι η ιμικουϊμόδη ίσως αποτελέσει μία αποτελεσματική θεραπεία κατά των λοιμώξεων από ιούς των ανθρώπινων θηλωμάτων καθώς και κατά των υποτροπιάζουσων λοιμώξεων από επιχείλιο έρπητα (HPV και RHL λοιμώξεων).