| Περίληψη: | Τα ενδοθηλιακά κύτταρα σχηματίζουν ένα μονόστιβο επιθήλιο το οποίο επενδύει όλα τα αγγεία του σώματος και διαδραματίζει σημαντικό ρόλο σε μία πλειάδα ομοιοστατικών μηχανισμών. Δύο από τις πιο χαρακτηριστικές λειτουργίες των ενδοθηλιακών κυττάρων είναι η συμμετοχή τους στην φλεγμονή και η δυνατότητά τους να δημιουργούν de novo και να επεκτείνουν το αγγειακό τοίχωμα (αγγειογένεση). Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF II (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor) ανήκει στην υπεροικογένεια των υποδοχέων στεροειδών-θυρεοειδικών ορμονών και μεταξύ άλλων παίζει σημαντικό ρόλο στην διαδικασία της αγγειογένεσης τόσο κατά την διάρκεια της εμβρυογένεσης όσο και σε παθολογικές καταστάσεις. Knock down του γονιδίου του Coup-TF II σε έμβρυα θηλαστικών οδηγεί σε θνησιμότητα με έντονες ανωμαλίες στην δημιουργία του αγγειακού, λεμφαγγειακού συστήματος, καθώς και σε μη φυσιολογική ανάπτυξη της καρδιάς. Ακόμα, ο Coup-TF II φαίνεται να εμπλέκεται στο μοριακό μονοπάτι που καθορίζει την ταυτότητα της φλέβας έναντι της αρτηρίας. Ο στόχος της παρούσας εργασίας ήταν να μελετήσουμε σε μεγαλύτερο μηχανιστικό βάθος τον ρόλο του παράγοντα αυτού in vitro σε καλλιέργειες ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων (Human Umbilical Endothelial Cells, HUVEC). Για αυτόν τον σκοπό, καταστείλαμε με ένα ειδικό siRNA τον Coup-TF II (σε ποσοστό που κυμαίνεται από 90% έως 40%) και εξετάσαμε την δυνατότητα των HUVECs να σχηματίζουν σχοινοτενείς δομές και πλέγματα σε υπόστρωμα Μatrigel, να πολλαπλασιάζονται, να μεταναστεύουν μέσω φίλτρων με πόρους διαμέτρου 8μm, καθώς και την δυνατότητά τους να επουλώνουν τραυματισμό που δημιουργείται σε τρυβλίο. Παρατηρήσαμε ότι η καταστολή του Coup-TF II οδηγεί σε μειωμένη ικανότητα δημιουργίας αγγείων κατά 50%, σε μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων κατά 20%, ελάττωση της ικανότητας μετανάστευσης κατά 25% και τέλος της ικανότητας να επουλώνουν
2
τραυματισμό κατά 25%. Επιπλέον, είναι παντελώς άγνωστο πως ο Coup-TF II επηρεάζει τις διαδικασίες που συμβάλλουν στην φλεγμονή, όπως η προσκόλληση λευκών αιμοσφαιρίων στο ενδοθήλιο. Παρατηρήσαμε πως η μειορύθμιση της πρωτεϊνικής έκφρασης του Coup-TF II μειώνει την απόκριση των ενδοθηλιακών κυττάρων στον προφλεγμονώδη παράγοντα TNF-α, όσον αφορά στην προσκόλληση της λευκοκυτταρικής πρόδρομης σειράς U937 σε καλλιέργεια HUVECs in vitro. Η παρατήρηση αυτή εγείρει ένα εξαιρετικά πλούσιο αριθμό ερωτημάτων και μελλοντικών στόχων. Βασιζόμενοι στα in vitro αποτελέσματά μας, μπορούμε συνολικά να συμπεράνουμε ότι η τροποποίηση της έκφρασης του Coup-TF II έχει σημαντικές λειτουργικές συνέπειες στην συμμετοχή του ενδοθηλίου σε διαδικασίες που λαμβάνουν χώρα κατά την αγγειογένεση και την φλεγμονή.
|
|---|
