Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων
Τα ενδοθηλιακά κύτταρα σχηματίζουν ένα μονόστιβο επιθήλιο το οποίο επενδύει όλα τα αγγεία του σώματος και διαδραματίζει σημαντικό ρόλο σε μία πλειάδα ομοιοστατικών μηχανισμών. Δύο από τις πιο χαρακτηριστικές λειτουργίες των ενδοθηλιακών κυττάρων είναι η συμμετοχή τους στην φλεγμονή και η δυνατότητά...
| Κύριος συγγραφέας: | |
|---|---|
| Άλλοι συγγραφείς: | |
| Μορφή: | Thesis |
| Γλώσσα: | Greek |
| Έκδοση: |
2016
|
| Θέματα: | |
| Διαθέσιμο Online: | http://hdl.handle.net/10889/9315 |
| id |
nemertes-10889-9315 |
|---|---|
| record_format |
dspace |
| institution |
UPatras |
| collection |
Nemertes |
| language |
Greek |
| topic |
Ενδοθηλιακά κύτταρα Αγγειογένεση Φλεγμονή Endothelial cells Coup-TF II HUVECs Angiogenesis 571.555 |
| spellingShingle |
Ενδοθηλιακά κύτταρα Αγγειογένεση Φλεγμονή Endothelial cells Coup-TF II HUVECs Angiogenesis 571.555 Μιχαήλ, Άρτεμις Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| description |
Τα ενδοθηλιακά κύτταρα σχηματίζουν ένα μονόστιβο επιθήλιο το οποίο επενδύει όλα τα αγγεία του σώματος και διαδραματίζει σημαντικό ρόλο σε μία πλειάδα ομοιοστατικών μηχανισμών. Δύο από τις πιο χαρακτηριστικές λειτουργίες των ενδοθηλιακών κυττάρων είναι η συμμετοχή τους στην φλεγμονή και η δυνατότητά τους να δημιουργούν de novo και να επεκτείνουν το αγγειακό τοίχωμα (αγγειογένεση). Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF II (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor) ανήκει στην υπεροικογένεια των υποδοχέων στεροειδών-θυρεοειδικών ορμονών και μεταξύ άλλων παίζει σημαντικό ρόλο στην διαδικασία της αγγειογένεσης τόσο κατά την διάρκεια της εμβρυογένεσης όσο και σε παθολογικές καταστάσεις. Knock down του γονιδίου του Coup-TF II σε έμβρυα θηλαστικών οδηγεί σε θνησιμότητα με έντονες ανωμαλίες στην δημιουργία του αγγειακού, λεμφαγγειακού συστήματος, καθώς και σε μη φυσιολογική ανάπτυξη της καρδιάς. Ακόμα, ο Coup-TF II φαίνεται να εμπλέκεται στο μοριακό μονοπάτι που καθορίζει την ταυτότητα της φλέβας έναντι της αρτηρίας. Ο στόχος της παρούσας εργασίας ήταν να μελετήσουμε σε μεγαλύτερο μηχανιστικό βάθος τον ρόλο του παράγοντα αυτού in vitro σε καλλιέργειες ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων (Human Umbilical Endothelial Cells, HUVEC). Για αυτόν τον σκοπό, καταστείλαμε με ένα ειδικό siRNA τον Coup-TF II (σε ποσοστό που κυμαίνεται από 90% έως 40%) και εξετάσαμε την δυνατότητα των HUVECs να σχηματίζουν σχοινοτενείς δομές και πλέγματα σε υπόστρωμα Μatrigel, να πολλαπλασιάζονται, να μεταναστεύουν μέσω φίλτρων με πόρους διαμέτρου 8μm, καθώς και την δυνατότητά τους να επουλώνουν τραυματισμό που δημιουργείται σε τρυβλίο. Παρατηρήσαμε ότι η καταστολή του Coup-TF II οδηγεί σε μειωμένη ικανότητα δημιουργίας αγγείων κατά 50%, σε μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων κατά 20%, ελάττωση της ικανότητας μετανάστευσης κατά 25% και τέλος της ικανότητας να επουλώνουν
2
τραυματισμό κατά 25%. Επιπλέον, είναι παντελώς άγνωστο πως ο Coup-TF II επηρεάζει τις διαδικασίες που συμβάλλουν στην φλεγμονή, όπως η προσκόλληση λευκών αιμοσφαιρίων στο ενδοθήλιο. Παρατηρήσαμε πως η μειορύθμιση της πρωτεϊνικής έκφρασης του Coup-TF II μειώνει την απόκριση των ενδοθηλιακών κυττάρων στον προφλεγμονώδη παράγοντα TNF-α, όσον αφορά στην προσκόλληση της λευκοκυτταρικής πρόδρομης σειράς U937 σε καλλιέργεια HUVECs in vitro. Η παρατήρηση αυτή εγείρει ένα εξαιρετικά πλούσιο αριθμό ερωτημάτων και μελλοντικών στόχων. Βασιζόμενοι στα in vitro αποτελέσματά μας, μπορούμε συνολικά να συμπεράνουμε ότι η τροποποίηση της έκφρασης του Coup-TF II έχει σημαντικές λειτουργικές συνέπειες στην συμμετοχή του ενδοθηλίου σε διαδικασίες που λαμβάνουν χώρα κατά την αγγειογένεση και την φλεγμονή. |
| author2 |
Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος |
| author_facet |
Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Μιχαήλ, Άρτεμις |
| format |
Thesis |
| author |
Μιχαήλ, Άρτεμις |
| author_sort |
Μιχαήλ, Άρτεμις |
| title |
Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| title_short |
Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| title_full |
Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| title_fullStr |
Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| title_full_unstemmed |
Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| title_sort |
μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα coup-tf ii στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων |
| publishDate |
2016 |
| url |
http://hdl.handle.net/10889/9315 |
| work_keys_str_mv |
AT michaēlartemis meletētoumetagraphikouparagontacouptfiistēnleitourgiatōnanthrōpinōnendothēliakōnkyttarōn AT michaēlartemis hcouptfiisroleinhumanendothelialcells |
| _version_ |
1771297228994904064 |
| spelling |
nemertes-10889-93152022-09-05T14:08:10Z Μελέτη του μεταγραφικού παράγοντα COUP-TF II στην λειτουργία των ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων hCoup-TF II’s role in human endothelial cells Μιχαήλ, Άρτεμις Φλυτζάνης, Κωνσταντίνος Τοπούζης, Σταύρος Κατσώρης, Παναγιώτης Michail, Artemis Ενδοθηλιακά κύτταρα Αγγειογένεση Φλεγμονή Endothelial cells Coup-TF II HUVECs Angiogenesis 571.555 Τα ενδοθηλιακά κύτταρα σχηματίζουν ένα μονόστιβο επιθήλιο το οποίο επενδύει όλα τα αγγεία του σώματος και διαδραματίζει σημαντικό ρόλο σε μία πλειάδα ομοιοστατικών μηχανισμών. Δύο από τις πιο χαρακτηριστικές λειτουργίες των ενδοθηλιακών κυττάρων είναι η συμμετοχή τους στην φλεγμονή και η δυνατότητά τους να δημιουργούν de novo και να επεκτείνουν το αγγειακό τοίχωμα (αγγειογένεση). Ο μεταγραφικός παράγοντας Coup-TF II (Chicken Ovalbumin Upstream Promoter Transcription Factor) ανήκει στην υπεροικογένεια των υποδοχέων στεροειδών-θυρεοειδικών ορμονών και μεταξύ άλλων παίζει σημαντικό ρόλο στην διαδικασία της αγγειογένεσης τόσο κατά την διάρκεια της εμβρυογένεσης όσο και σε παθολογικές καταστάσεις. Knock down του γονιδίου του Coup-TF II σε έμβρυα θηλαστικών οδηγεί σε θνησιμότητα με έντονες ανωμαλίες στην δημιουργία του αγγειακού, λεμφαγγειακού συστήματος, καθώς και σε μη φυσιολογική ανάπτυξη της καρδιάς. Ακόμα, ο Coup-TF II φαίνεται να εμπλέκεται στο μοριακό μονοπάτι που καθορίζει την ταυτότητα της φλέβας έναντι της αρτηρίας. Ο στόχος της παρούσας εργασίας ήταν να μελετήσουμε σε μεγαλύτερο μηχανιστικό βάθος τον ρόλο του παράγοντα αυτού in vitro σε καλλιέργειες ανθρώπινων ενδοθηλιακών κυττάρων (Human Umbilical Endothelial Cells, HUVEC). Για αυτόν τον σκοπό, καταστείλαμε με ένα ειδικό siRNA τον Coup-TF II (σε ποσοστό που κυμαίνεται από 90% έως 40%) και εξετάσαμε την δυνατότητα των HUVECs να σχηματίζουν σχοινοτενείς δομές και πλέγματα σε υπόστρωμα Μatrigel, να πολλαπλασιάζονται, να μεταναστεύουν μέσω φίλτρων με πόρους διαμέτρου 8μm, καθώς και την δυνατότητά τους να επουλώνουν τραυματισμό που δημιουργείται σε τρυβλίο. Παρατηρήσαμε ότι η καταστολή του Coup-TF II οδηγεί σε μειωμένη ικανότητα δημιουργίας αγγείων κατά 50%, σε μείωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων κατά 20%, ελάττωση της ικανότητας μετανάστευσης κατά 25% και τέλος της ικανότητας να επουλώνουν 2 τραυματισμό κατά 25%. Επιπλέον, είναι παντελώς άγνωστο πως ο Coup-TF II επηρεάζει τις διαδικασίες που συμβάλλουν στην φλεγμονή, όπως η προσκόλληση λευκών αιμοσφαιρίων στο ενδοθήλιο. Παρατηρήσαμε πως η μειορύθμιση της πρωτεϊνικής έκφρασης του Coup-TF II μειώνει την απόκριση των ενδοθηλιακών κυττάρων στον προφλεγμονώδη παράγοντα TNF-α, όσον αφορά στην προσκόλληση της λευκοκυτταρικής πρόδρομης σειράς U937 σε καλλιέργεια HUVECs in vitro. Η παρατήρηση αυτή εγείρει ένα εξαιρετικά πλούσιο αριθμό ερωτημάτων και μελλοντικών στόχων. Βασιζόμενοι στα in vitro αποτελέσματά μας, μπορούμε συνολικά να συμπεράνουμε ότι η τροποποίηση της έκφρασης του Coup-TF II έχει σημαντικές λειτουργικές συνέπειες στην συμμετοχή του ενδοθηλίου σε διαδικασίες που λαμβάνουν χώρα κατά την αγγειογένεση και την φλεγμονή. Endothelial cells form a single layer that invests all the vessels of the body and play an important role in a variety of homeostatic mechanisms of the body. Two of the most characteristic features of endothelium are the participation in the process of inflammation, but also its ability to remodel the vascular wall (angiogenesis). Chicken ovalbumin upstream promoter transcription factor (Coup-TF II), a member of the nuclear receptor superfamily, plays a critical role in angiogenesis during both developmental and pathological conditions. Targeted deletion of the Coup-TF II gene results in embryonic lethality with defects in angiogenesis, lymph angiogenesis and heart development. It is also shown that Coup II is actively connected in the molecular pathway determining veins. Because Coup-TF II is also strongly expressed in Human Umbilical Endothelial Cells (HUVECs), we hypothesized that it might play an essential role in the intrinsic function of endothelial cells. To answer this question, we knocked down Coup-TF II in HUVECs (90% to 40%) and we examine their ability in sprouting, proliferation, migration and in wound healing. We observed was that depletion of Coup-TF II decreased substantially the number of sprouts (50%), the number of proliferating cells (20%), affect endothelial cell migration (25%) and decreased their ability in wound healing in a critical way (25%). Still, a very interesting goal in our study was to determine whether the silencing of Coup-TF II affects the ability of endothelial cells to participate actively in inflammation. We already know that endothelial cells play a key role in the ability of immune cells moving to the affected area and the involvement of Coup-TF II in this process was a completely unexplored field. What we observed was that the lack of this particular transcription factor reduces the response of endothelial cells to proinflammatory agents, such as Tumor Necrosis Factor α (TNF-α). Overall, based on our in vitro results it is recommended that the modification of Coup- 2016-06-08T10:35:33Z 2016-06-08T10:35:33Z 2015-11-18 Thesis http://hdl.handle.net/10889/9315 gr 6 application/pdf |
