| Περίληψη: | Η αφλατοξίνη Μ1 (ΑFM1) είναι μια ισχυρά τοξική και καρκινογόνος ουσία, η οποία εκκρίνεται στο γάλα ανθρώπων και ζώων που έχουν καταναλώσει τροφή μολυσμένη με αφλατοξίνη Β1. Για το λόγο αυτό, η ανίχνευση της στο γάλα είναι ιδιαίτερα σημαντική και η σχετική έρευνα εστιάζεται στην ανάπτυξη ταχειών και υψηλής ευαισθησίας μεθόδων. Στο πλαίσιο αυτό, σκοπός της παρούσας εργασίας ήταν η ανάπτυξη μεθόδου ανοσοχημικού προσδιορισμού της αφλατοξίνης Μ1 σε δείγματα γάλακτος χωρίς τη χρήση ιχνηθετών με οπτικό αισθητήρα που βασίζεται στη φασματοσκοπία ανάκλασης λευκού φωτός. Ο αισθητήρας επιτρέπει την ανίχνευση βιοαντιδράσεων σε πραγματικό χρόνο μέσω της παρακολούθησης των μεταβολών του φάσματος συμβολής του φωτός που ανακλάται από επιφάνεια πυριτίου/διοξειδίου του πυριτίου στην οποία λαμβάνει χώρα η αντίδραση. Στα πλαίσια της εργασίας, αναπτύχθηκε αρχικά ενζυμοανοσοχημικός προσδιορισμός ανταγωνιστικού τύπου της AFΜ1 σε φρεάτια μικροτιτλοδότησης, με στόχο την αξιολόγηση των διαθέσιμων αντιδραστηρίων και την επιλογή των συνθηκών ανάλυσης. Η μέθοδος που αναπτύχθηκε είχε ιδιαίτερα καλή ανιχνευσιμότητα (όριο ανίχνευσης 5 pg/mL) και αξιόπιστη. Στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε μεταφορά και βελτιστοποίηση του ανοσοπροσδιορισμού στον αισθητήρα όπου μελετήθηκαν επίσης η δυνατότητα αναγέννησης του αισθητήρα. Επίσης, μελετήθηκε η δυνατότητα προσδιορισμού της AFM1 σε δείγματα γάλακτος και διαπιστώθηκε ότι ο προσδιορισμός ήταν εφικτός για διάφορα είδη γάλακτος χωρίς προκατεργασία του δείγματος. Η μέθοδος προσδιορισμού της AFM1 με τον οπτικό ανοσοαισθητήρα ήταν ταχεία (15 min), με χαμηλό όριο ανίχνευσης (25 pg/mL), ακριβής (ανάκτηση 90-110%) και επαναλήψιμη (ενδο- και δι-αναλυτικός συντελεστής διακύμανσης 2,1-6,3 και 3,5-8,2%, αντιστοίχως). Ο αισθητήρας παρείχε δυνατότητα αναγέννησης και επαναχρησιμοποίησης της ίδιας επιφάνειας για 15 τουλάχιστον φορές μέσα στην ίδια ημέρα. Επιπλέον, το σχετικά χαμηλό κόστος της οργανολογίας και των αναλωσίμων καθιστούν τον αναπτυχθέντα ανοσοαισθητήρα ιδιαίτερα ελκυστικό για μετρήσεις πεδίου.
|
|---|
