| Περίληψη: | Πρωτεΐνες και DNA αποτελούν αντικείμενα της έντονης ερευνητικής δραστηριότητας,
που αναπτύσσεται ραγδαία τα τελευταία χρόνια. Η αξιοποίησή τους κρίνεται
απαραίτητη για την ανάπτυξη σύγχρονων μεθόδων χημικής ανάλυσης. Μια ειδική
κατηγορία πρωτεϊνών, οι φωτοπρωτεΐνες, παρουσιάζουν έντονο ενδιαφέρον, καθώς
είναι μόρια, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν ως ιχνηθέτες, δεδομένου ότι
εκπέμπουν έντονο φως χημειοφωταύγειας.
Το αντικείμενο της παρούσας μεταπτυχιακής διπλωματικής εργασίας είναι η έκφραση
φωτοπρωτεϊνών σε βακτήρια, καθώς και η μελέτη απομόνωσης DNA από φυτικό ιστό
(φύλλα ελιάς).
Πιο συγκεκριμένα, στην παρούσα ΜΔΕ παρατίθενται τα εξής:
(I) Έκφραση, απομόνωση και καθαρισμός της πρωτεΐνης, Αικουορίνης. Αρχικά,
εκφράζεται η αποπρωτεΐνη, Αποαικουορίνη, από μετασχηματισμένα βακτηριακά
στελέχη Escherichia coli. Ο μετασχηματισμός επιτυγχάνεται εισάγοντας στο
βακτηριακό κύτταρο τον ειδικό πλασμιδιακό φορέα, ο οποίος φέρει της κατάλληλες
αλληλουχίες έκφρασης της φωτοπρωτεΐνης. Στη συνέχεια, πραγματοποιείται
απομόνωση της Αποαικουορίνης, χρησιμοποιώντας την χρωματογραφία συγγένειας
ακινητοποιημένου μετάλλου. Τέλος, πραγματοποιείται η ενεργοποίηση της
Αικουορίνης με την προσθήκη σελεντεραζίνης ως υποστρώματος και μετράται η
ενεργότητά της παρουσία ιόντων Ca2+.
(II) Η απομόνωση του DNA από φυτικό ιστό (φύλλα ελιάς) χρησιμοποιώντας το
αντιδραστήριο CTAB, και οι διάφορες δοκιμές ενίσχυσης του DNA με την τεχνική της
PCR, οδηγεί στην εύρεση των βέλτιστων συνθηκών για την τελική ανίχνευση των
προϊόντων PCR.
|
|---|
